脂质体转染

huangcong1988

一个我自己的觉得很弱智的问题，质粒转细胞，脂质体的方法，在转染之前要把细胞培养基全部吸出来么？就是说在加入混合体系之前，把孔板中的10%培养基吸出来，用opti—MEM洗两遍，然后把混合体系加进去，然后再补足opti—MEM么？我怎么觉得不用吸出培养基，直接把混合体系加进去进行了啊？

梓玥

血清对脂质体的转染有影响的，但是fugene 6影响较小。opti—MEM这种培养基很适合转染的。

yyshpy

标准方法是应该吸出10%的培养基，加入3%的血清培养基，然后加opti—MEM混合体系，6-8h后换液，换成10%培养基，但是根据经验，把opti—MEM做好的混合液，直接加进去就行，转染效率不会有太大影响，做过的
, t& y1 ?# b) ]) c/ D1 C, Y8 U

yyshpy

另外，脂质体正在被淘汰，现在已经出了几种对细胞毒性更小的转染试剂，可以去了解一下

huangcong1988

回复 梓玥 的帖子
4 V) G. _( |! b/ m$ M2 w9 o+ G6 T& o* E; ]0 g* C
想问一下您，就是fugene 6是什么？

huangcong1988

回复 yyshpy 的帖子- m( O+ B* N+ r6 A) X7 A3 ]# W
' S' A3 a: N/ P9 A2 i( O; O0 }
非常感谢

牙牙丫丫123

我们一般都是在转染之前给细胞换成opti-MEM培养液，换液之前最好是用opti-MEM洗一遍，之后把Opti-MEM 混合液加入，6小时后换液，换成无双抗培养液

eley

其实不需要这么复杂的，只要在转染之前两小时换成无抗的培养基，然后按照Protocol配置混合液，然后加进去就行了
. n, L6 X# [  B& Q/ j其实不一定要用的opti-medium的，因为这个培养基是一个优化的培养基，如果你自己养的细胞的培养基不适合用来转染，可以使用opti-medium, }) ]8 @5 f+ M4 L
其实我以前就没有用过opti-medium，而是直接用培养基配成的混合液，加进去一样的表达，而且很好，不要这么复杂的1 }& T% P! Q' n6 X
对了，还不知道你用的是什么公司的转染试剂，按照Protocol来就行了，希望对你有帮助~~:):)

huangcong1988

回复 eley 的帖子) O; @9 g9 {: V, N7 Z/ e
2 k' s# t* E% C. ~7 J" V
谢谢，我是听他们说血清对于质粒转染有影响，所以问问是否在转染前要将细胞里面的培养基吸出

梓玥

回复 huangcong1988 的帖子6 B4 X( M6 d9 O3 l# d* Y

/ W6 l0 K# U! E3 c也是一种脂质体转染的试剂，不过我们现在用的是lip-2000，效率很好的，就是有点贵。