微孔板实验如何减少"边缘效应"

Temin

各位大虾，大家在用96-或/和384-微孔板做cell-based assay的时候，是否会遇到边缘效应（Edge Effect），表现出来的效应一般是边缘的一圈well读值异常，我观察和请教了周边的人，大家对这种效应的处理，一般有这几种方式：" b$ }# m; @/ X, |8 h) d
1、周围一圈微孔放弃不用，不种细胞，而是铺上培养基或者水；
. w& w, ~6 B5 w) V$ ^, a# v5 X4 P2、Microplate在CO2培养箱培养时，周围用加样槽或者其他容器装水，使得microplate周围的湿度加大；. C9 L7 z( \$ r4 G+ H( S
3、Microplate放入培养箱之前，先在室温平衡30min或者60min，待细胞贴壁之后再将microplate放入培养箱；
' r0 ?  m- H  l4、方法2和方法3的组合。
5 ]7 N1 d/ P1 U: r2 s根据经验，不同的细胞类型，边缘效应的影响各异；对24h的实验来讲，边缘效应有些细胞可能影响极微，但是对有些细胞来讲，影响极大，甚至都不能开关培养箱门（这个见有人单独霸占一个培养箱，里面就放着他的几块96孔板）；而对72h或者更长培养时间的实验，边缘效应一般很大，经常导致周围的一圈微孔不能使用。* X6 G0 L+ P( m+ K1 s
那么，我一直很想知道，边缘效应的原因是什么，在上述方法2的理念里，是因为蒸发效应，导致培养基里水分减少，渗透压等理化因素变化，影响细胞的生长，所以在周围加水增加湿度，可以减少边缘效应。在上述方法3的理念里，是因为温度不平衡，骤然把微孔板从室温放入37度，那么周边孔更早升温，而这个时候细胞还在沉降，会向边缘的温度高的地方飘去降落，造成细胞密度局部加大，因为细胞的接触抑制，所以边缘的孔里面细胞生长速度减慢，所以造成边缘效应。  z1 A! x( D. l/ Q4 @( g+ Y/ n
我觉得两种说法都有道理，但是，在实际当中，边缘效应还是无法避免，只能降到一个差不多可以接受的水平（相对微孔板中央位置，差异10%以内。）
: |% l, [% J2 K3 N2 A% q2 h! Q4 Y& [所以，我想请教大家，你们是怎么操作的？对于边缘效应的理论又是什么？谢谢！6 A; t6 f: v% U; f" C
附件中是一篇关于边缘效应的文章，供大家参考。A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays

Temin

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+ z" |! _6 N7 v: b; g6 i  q. j坐等大虾～～～

Temin

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谢谢你的建议，氧气的因素应该也很大，你那里有相关的文献资料吗？