急，急，急！油红O染色？

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请问有谁做过油红O染色啊，稀释液怎么配呢，我用双蒸水3:2配的，静置10分钟后出现分层，然后混匀后进行染色，避光孵育15分钟后，油层已帖服平皿低，根本就下不掉啊，求解！？？？

tjbone

油红O脂类染色法
: l; Z" O8 \  v$ j- V+ D( Y8 x+ t' z / c+ K* _$ a. v, i) v/ r
    油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。
. |# v0 e; v2 f( L ( c* e9 j$ e, y3 G, P* ^/ c
    （一）油红O染液的配制* |2 K$ v# }3 g0 h$ A; H4 ]$ e5 K
    1．油红O    1g
- z6 d2 Z- t8 s+ c0 @( ~$ r& v, A- G       异丙醇    lOOml
; O4 z! J- F7 D% O7 R8 P    2．油红O    足量6 _6 B5 o" l* f) i1 e$ t( r' q
       异丙醇    lOOml
3 C8 q( U: R  f4 |; F# l, r    配成油红O饱和溶液，使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用。) _1 _. `; X! W% p; Y8 s; |

& E. c6 G- ~8 I# Z    （二）染色程序3 v/ l! p3 U6 h+ S% x  D' y
    1．切片用甲醛—钙固定10分钟；
5 W+ a  d1 j3 f# O7 x; t0 t    2．蒸馏水洗；4 |# h8 A2 |) D+ l9 o* a) {
    3．60％异丙醇浸洗；
6 r: R0 c+ K2 x2 d0 ~/ v! B8 V& v' p8 _    4．1由红O染液10分钟(染液可回收再利用)；: K' F4 z; I1 N8 O8 v( {: L2 k
    5． 60％异丙醇分色至背景五色；
" J% u: z3 r9 {    6．蒸馏水洗；
9 |2 t0 t- Q  J, W    7．Mayer苏木精复染；
0 c# M# J" t/ ?& d" V. o    8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；
/ R( @3 S+ L4 k6 I7 p; N8 {    9．蒸馏水洗；
5 m3 k6 @$ W9 m, ?: ~" g: Q    10．甘油明胶封片。
" g0 J% p$ t! U- q1 j0 c 2 h- m' b! x. [9 n# n5 U- Q: m9 }
    结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。
) b5 Y. H; ~# y% k, d' k

tjbone

油红O脂类染色法
1 z+ m6 o4 y$ B7 c" b1 `8 N ! D- t+ j3 _/ t
    油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。
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    （一）油红O染液的配制
' v: f3 {9 {4 {: Y  w( g# i    1．油红O    1g
1 F6 u: y  C2 O9 A       异丙醇    lOOml" K4 Z8 F! u$ W/ N3 V
    2．油红O    足量8 z! e5 E  ~7 U' M3 q. {
       异丙醇    lOOml) [3 I+ V$ ^8 f
    配成油红O饱和溶液，使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用。4 t9 O. @: o. X, O6 i% j4 _" r9 L* n' ]$ f

) o0 O& V  F" p; h& t0 [    （二）染色程序1 r4 B; q# y; {0 V: b% Z
    1．切片用甲醛—钙固定10分钟；$ T- m1 I5 ^+ {5 S3 ~
    2．蒸馏水洗；
) d$ h& g3 R, O4 o    3．60％异丙醇浸洗；- u6 H  S- y( Y, y" ~% N' F7 [
    4．1由红O染液10分钟(染液可回收再利用)；
( i% g2 K$ l1 U7 T    5． 60％异丙醇分色至背景五色；
5 G5 n/ g7 d6 R2 x    6．蒸馏水洗；! v) J- T$ n+ h$ v0 n7 S2 A
    7．Mayer苏木精复染；
* ?& g9 X2 h3 o" J3 Q8 f3 f6 Y    8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；, U2 f1 h# f7 X) n
    9．蒸馏水洗；& q& `1 S0 u' q) ~0 Y( r% D
    10．甘油明胶封片。
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    结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。! B9 P/ c! t/ i

ljzmy82

配好之后，需要过滤一下，才能用这样效果较好些，我的实验都是这样做的

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我也是过滤后用的，染完后就一层红色的油层粘附瓶底，生理盐水根本就洗不掉的' i* f! |3 n+ T: V$ G, B& {8 `

841961279

请问 ，2个步骤中60％异丙醇分别作用多久啊1 V% D$ V- ~- w% \3 P5 F% M$ Y

zerollx

; p, I2 K0 |( P- ~2 z" [( m
" _  `3 c- V- D0 {3 K3 q; H. U
油红-O染料：
; y, f# J9 }9 H6 Z               储液：0.7g油红-O溶解在200ml的异丙醇中，0.2um滤器过滤（除去沉淀），室温储存。
* d- E% k; ^: ?# m$ F2 \# F1 `) T) J              工作液：配成上述浓度60%的浓度，即加30ml储液，20ml蒸馏水，混匀，室温放置30min，若有眼见的沉淀物，可再次过滤，24h内使用。
9 y8 x# a6 J' N
3 L/ h9 C% W# S$ W7 R/ ~2 a0 j& f
, U3 D. c7 C4 s
染色：
# k" F4 J! Q7 S        固定：弃去培养基，DPBS洗涤，4%多聚甲醛固定15min，弃去固定液，DPBS洗涤（此步后可在4度保存数月）, o1 T, ~2 e/ m' E( K  f( `! g, I( z
              染色：六孔板中每孔加2ml油红-O染料，室温孵育20~60min。9 C- q9 b9 Y" O0 K2 v9 }1 u; x% V
        脱色：用2ml DPBS洗涤直至背景色干净，注意一定要洗干净（不要加太多的DPBS洗涤，否则会将染料浮起得更高将皿壁也染上），有效的洗完之后，加入2ml的DPBS,倒置显微镜下观察。2 }  A  ^7 B+ M, O, n. ^$ {
        2 v) ~2 P+ K! @" K. S

6 f! Q  O& T% q( D5 N/ R. h3 y" Z此法亲自使用，百试不爽！

zerollx

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# d2 E& C2 w9 Q% h8 W
) O3 g- `- j7 W; _从液面表面吸取洗涤液，而不是将枪头插到液面下，因为油是漂着的，反复操作直至干净，当然想要完全洗干净是不可能的，只是尽可能的去除，洗完后再加DPBS，将残留的少量染料悬浮于液面，这样就不会影响你皿底细胞的观察了，祝实验顺利……

841961279

我过滤了2次后，仍然会出现上面的水层、中间的鲜红层、下面的黑乎乎沉淀，那染色时使用的应该是中间鲜红的那层吗