悬浮培养出来的干细胞团怎么传代？

eileenyangliu

各位大侠，小女子刚入门学习养干细胞，现在用悬浮培养法已经出现干细胞团克隆，想让其传代，所以尝试用胰酶消化干细胞团进行传代，但5min团依然不能变为单细胞，而且消化后未见有新的干细胞团出现，现在不知所措，不能传代怎么办？这对之后的实验有很大阻碍，特此请教各位！！！！

phdyhm

悬浮细胞：一般勿需消化离心，可用移液器或巴氏吸管轻轻吹打将细胞团吹打散开---直立静置1-3分钟---吸取上层培养基1/3-2/3 --- 加入新配制的培养基（含双抗和10%小牛血清）--- 传代即可。倒置显微镜下可见细胞成葡萄状成串，有立体感，即液体各个层面都有大量细胞团，是传代的好时机。9 b+ q7 z: U/ i. T

eley

干细胞可以用胰酶消化吗？这样不会使干细胞分化吗？
" r5 }! g, @5 m0 U) `1 |1 i" H你用的是人的干细胞还是鼠的啊，不同的干细胞生长状况和生长条件不一样的，所以还是分清楚。1 z$ a& ]; Z9 W0 G
干细胞大多数也不是悬浮的啊，不知道你的具体培养情况和培养条件是什么啊？" R7 S( o1 C- Q% S% _
希望你能写清楚一些~~

eileenyangliu

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7 H5 y3 e8 _+ ^4 @5 |% o我是做羊的干细胞，从皮肤里提取干细胞，看文献是用的悬浮培养出干细胞球，我认为胰酶可以消化干细胞，但是损伤比较大，而且时间一长干细胞都被消化死了，我操作时5min胰酶作用发现大部分干细胞并不能消化成单个细胞来传代，所以~不知所措，不知道你们那做干细胞的都怎么来传代增殖呢？我刚入门学习养干细胞，不是很懂，希望可以多多学习！

eileenyangliu

回复 phdyhm 的帖子' n9 p# R/ Q9 X: G. P* F& n
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谢谢，但是我有点疑问，干细胞团一般抱团很紧的，只靠简单的机械吹打就能将细胞团吹散成单个细胞吗？机械吹打不会损伤干细胞吗？需要多么大的力度？吹打多长时间为宜呢？这样传代后干细胞团会变的比之前更多吗？你也做悬浮培养的干细胞吗？咱们可以相互学习~

bin

神经干细胞球听说可以吹成单细胞，但是皮肤干细胞球就好像不可以了，我也是做皮肤干细胞的，我想问一下你原代取材用什么消化的，你可以换成胶原酶I试一试，消化10-20min。

bin

其实吹打对细胞的损伤比用酶消化来得更大，建议用胶原酶消化，时间长一点，吹打时轻一点。

aulenuyah

唉，还是听师兄的吧，上我那去拿胶原酶去

eileenyangliu

回复 bin 的帖子) j  k3 \, G9 Y  L

8 b6 u$ O% T7 F$ c3 ?你好，你也是做皮肤干细胞呀，咱们以后可以相互交流一下，相互学习，我原代取材没有消化，就是用的组织块法培养的

eileenyangliu

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嘿嘿，看来只能拿你的胶原酶试一下了