关于DMEM/F12培养液的灭菌

dmmwhb

用粉配50mlDMEM/F12培养液，然后加胰岛素、EGF、牛白蛋白、B27、双抗，最后用O.22um的过滤器过滤，这样会不会将上面加的东西也过滤除去啊？有配过人能给解答一下呗，先谢谢了

yxzxlmlf

过滤一次应该没问题，我是先滤DMEM/F12后再加入胰岛素、EGF等，这些都是无菌包装的

pharmD

millipore 的膜，绿色和蓝色之分，其中一种对非特异性蛋白质吸附小。

gandanxiaoyang

一般只是培养基过滤，至于要加的各种因子或试剂，应该是用无菌的溶液配制、无菌分装的。8 w1 r0 t4 b8 ]& n5 f
更为重要的是，这些因子在培养基中不能长期稳定存在的，所以，推荐即用即加，以保持最好的生物学活性。

新疆八钢

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2 w# k$ D- D! b" y# n( V; b6 s; P; f- [- T0 e8 T& L" m
用O.22um的过滤器过滤不用考虑大分子的损失，即使有些吸附不会影响培养液性质，我实验室做过对比没有影响

jxydiandian

而且这些蛋白的分子量也不大，其蛋白的大小也远小于0.22um的孔径

jxydiandian

一般不至于，你加的量到培养基后最终浓度很低的，不足达到被滤器截留的份儿

have-a-rest

zxiaoxiao311 发表于 2011-11-29 12:58
9 S0 y; m, B7 R- z8 Y. ?( J, M也可以先用粉配50mlDMEM/F12培养液，然后用O.22um的过滤器过滤后，在洁净操作台无菌操作加如胰岛素、EGF、牛 ...

' r1 A2 g9 R8 V" }1 J  ~
就这样做！

dmmwhb

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+ t) q4 Z1 O: [5 c: u
, ~; w' t0 I' C5 v$ [6 ]3 h5 J谢谢，我用的是低蛋白粘附膜过滤器，不知道行不行，正在试验中

dmmwhb

回复 zxiaoxiao311 的帖子; V8 U2 d1 K/ O/ e4 g9 u9 ^- ]
% ?  q) o8 w$ f
谢谢，但是胰岛素、牛白蛋白也需要除菌的呀，EGF、B27、双抗是分装的，配的时候融化等过程可能被污染，所以我就考虑加一块在过滤下，正在试验中能不能养起来