ips分化

sizhengliu

新手请教各位一个问题：我想诱导体细胞成ips，然后再向特定方向分化，我需要选择哪种诱导方式（慢病毒、腺病毒、mRNA···）更为可行？哪位前辈有这些方式的比较资料？多谢！

sizhengliu

可以分享自己的资料吗？自己顶··

刘森泉

小鼠iPS重编程（逆转录）: `; o) b8 `* t7 @' W) W

, {& j- d  S6 z- i  L" |( s' i1.        ①4份293T细胞，80%，10ml培养基；; }0 L  c8 O* y: w
②复苏一株2代MEF；# L! ?3 H4 y$ j( T4 h! D2 o
2.        ①半量换液，培养1h；
+ V0 e9 _) L. M* ~$ V②4份病毒：因子15ug、GP15ug、G4ug、TE（437-V）、CaCl263ul、2XHBS500ul，0.5h后加入293T细胞；  D. ]& y( [' J  X& ]) n
③用0.1%明胶处理一块六孔板，2个孔；# @+ F5 |& B- h. d: Y
④6h后换成5ml新鲜293T培养基，加50ul sodium butyrate；
( [2 t" X" }  i. V. q6 I3.        ①六孔板明胶孔用D-PBS洗3次；
# O4 S, B1 S3 r" C8 j! R' N3 V②MEF转移到明胶处理的孔里，准备转染；
# g6 w- T2 G! k& {2 ~6 w/ d4.        每盘收1.5ml病毒（其余继续培养），混合后过滤，加4ml至MEF中，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基；; l, D9 Y$ s7 L" }) U8 h6 }6 q
5.        收集其余病毒混合过滤添加，再加4ul polybrene，6h后换新鲜MEF培养基，新鲜培养基中加VC和VPA（2uM）；0 M; V2 b& _2 ]3 d4 G, ]; U+ w
6.        mitomycin C-7ug/ml处理基质细胞2h，D-PBS洗4次，将转然后的MEF转移至基质细胞上。换mES培养基，加VC和VPA；, R/ L" R4 f& c9 a. }( J
7.        每天换液。$ ]: G7 X: Y, e1 S$ q+ u/ Y

刘森泉

你做什么方面的分化啊？要人的还是小鼠的iPS，上面的protocol仅作参考，希望可以帮到你。