请教如何把多个因子连到一个质粒里去：episomal的构建。

jieniao1

我现在就是做这个的，我就用的是AMV启动子和IRES（核糖体内部进入位点）连接的，但是我只是连接两个基因序列，两个都能顺利表达，挺好的，我下一步是分析表达效率，其实这个和正常构建质粒是一样的，酶切，连接，有很多这样的资料的，你看看addgene的网站上，就有很多这样质粒的图谱！

jieniao1

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不对！从理论上讲，如果你要连入4个片段，是需要8个酶切位点，每个片段是分开的，3个片段要连在IRES的后面，四个片段中间应该有三个IRES，也就是说一个“promoter ---片段1---IRES---片段2---IRES---片段3---IRES---片段4---终止子”。IRES在很多的载体中就有的，很多现成的载体上就直接什么都带了，你到NCBI上也能找到IRES的序列，大约是600KB，你也可以自己构建个载体，这样比较麻烦，没有必要，载体上还有很多其它的重要因素，你到addgene的网站上搜一搜就能找到很多类似的载体，有的是免费的，花不了多少钱！