如何防止人的脂肪干细胞污染？

xujenny

养的细胞两天就污染，能说说防止污染的关键步骤如何保存标本，对消化的胶原酶的要求，对离心的时间、转速等的要求。谢谢大家，帮忙出出主意

冠忠

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+ r# y8 W+ A1 B# f( D! M0 z+ k2 G4 f. z8 m. r' A
有几点可以留意:1 z$ g: f# {% j* O7 {4 }
* f  z! t; Z& K3 Q
1.        用PBS冲洗脂肪的次数增加，如5次左右。
, l% u5 m: _; X# o2 L. f; D2.        在消化的胶原酶加入抗生素(P/S)。
  p1 H1 N% o8 m7 [) B: `& P" o6 T4 d  @9 b
这样可减低污染!!
9 J8 E3 {& R) P2 g/ w6 @  V- z

zhusealin

保存标本的培养基里面加双抗，PBS多冲洗几次，PBS里面也加双抗

iceyang

第一，标本剪碎后PBS冲一下后，最好在氯霉素里泡上一段时间
/ W) E" u  \+ I第二，胶原酶一定要过滤1 q1 {- G* X6 l- }1 n7 n; C! B8 f
第三，离心2000RPM,5-10MINS
% W7 s& \3 _. `* w: |

都市青蛙

做原代在冲洗和P0培养的时候都用点抗生素吧，但是太多抗生素也会影响细胞状态，自己要多摸摸
  h: w% e4 j4 d6 c( {. s我也是污染很多，从原核到真核……
7 @% L- H- `* ]( q最近还有一种很奇怪的污染物，稍后发些图片大家讨论下: u- F+ n% K- E5 b4 H! J3 O
呵呵

lizzy_81

首先你得保证你拿到的脂肪标本是无菌的，这步的无菌操作很重要，从器材到环境到手术过程，注意无菌的控制。在脂肪标本中加入含有抗生素的培养液也能抑制细菌，但是最主要还是要注意无菌操作。实在不行的话，把从脂肪中分离的SVF直接分一半冻存起来，万一还有污染，可以讲冻存的细胞复苏一下再培养。

your1024

PBS漂洗多次不知道有没有用，不过担心污染的话中间可以加双抗漂洗，不过之后还要再用PBS洗一次。培养液里也可以加上双抗。离心的话，我们是1000RPM，8min左右。不过最重要的还是楼上说的，无菌意识。

xujenny

经过大家提醒，今天看到梭型细胞贴壁