如何防止人的脂肪干细胞污染？

xujenny

养的细胞两天就污染，能说说防止污染的关键步骤如何保存标本，对消化的胶原酶的要求，对离心的时间、转速等的要求。谢谢大家，帮忙出出主意

冠忠

回复 xujenny 的帖子# P6 R- `5 k0 _& ~
3 B2 L! Y$ `/ A# v1 I' S
有几点可以留意:2 k, v0 l, y9 b7 G, I" x

3 u8 S5 H( q/ [$ ?) h4 c) e1.        用PBS冲洗脂肪的次数增加，如5次左右。
1 i1 K* q; P1 K. K& `" g, [$ w2.        在消化的胶原酶加入抗生素(P/S)。" p; G: ?( ]' n( V& t2 Z/ G

3 U; M/ n5 x, R这样可减低污染!!' Y8 B1 i* r0 ]2 w/ r

zhusealin

保存标本的培养基里面加双抗，PBS多冲洗几次，PBS里面也加双抗

iceyang

第一，标本剪碎后PBS冲一下后，最好在氯霉素里泡上一段时间% T# @( x& @) G. M5 }" P
第二，胶原酶一定要过滤
( d5 J/ E: ?3 q" n第三，离心2000RPM,5-10MINS  u8 q* G5 z  O) t8 R$ k

都市青蛙

做原代在冲洗和P0培养的时候都用点抗生素吧，但是太多抗生素也会影响细胞状态，自己要多摸摸
, [8 M4 s2 K5 i6 u我也是污染很多，从原核到真核……
8 V5 n6 d5 B) u最近还有一种很奇怪的污染物，稍后发些图片大家讨论下
4 b7 q$ b7 A5 X; @( G9 }# d呵呵

lizzy_81

首先你得保证你拿到的脂肪标本是无菌的，这步的无菌操作很重要，从器材到环境到手术过程，注意无菌的控制。在脂肪标本中加入含有抗生素的培养液也能抑制细菌，但是最主要还是要注意无菌操作。实在不行的话，把从脂肪中分离的SVF直接分一半冻存起来，万一还有污染，可以讲冻存的细胞复苏一下再培养。

your1024

PBS漂洗多次不知道有没有用，不过担心污染的话中间可以加双抗漂洗，不过之后还要再用PBS洗一次。培养液里也可以加上双抗。离心的话，我们是1000RPM，8min左右。不过最重要的还是楼上说的，无菌意识。

xujenny

经过大家提醒，今天看到梭型细胞贴壁