综合讨论：脐带间充质干细胞的分离，传代和分化的问题

wind789

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回复 eggnihao 的帖子7 z/ ]9 P; b! v' @. w
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消化完的果冻用大量PBS稀释，只离心清洗一次。4 i1 O" d& s1 R8 K9 m" B
传代的时候镜下细胞稍变圆就立即中止消化，加入完全培养基，反复轻柔吹打瓶壁。

eggnihao

sailree 发表于 2011-12-2 10:58
& b! _3 {- n. b( d( _酶消化不是好方法，对细胞质量影响还是很大得出来的细胞容易分化，形态扁平。

3 H2 V1 a' o% z: O6 @* f& A我现在就是遇到这种情况，传代后细胞扁平，出现老化现象，请问你们是怎么解决这种问题的，有没有其他的方法

sailree

酶消化不是好方法，对细胞质量影响还是很大得出来的细胞容易分化，形态扁平。

liluli0715

我们组织贴壁也做过二型胶原酶消化脐带，1-3h的消化时间都试过，发现消化时间越长，消化液越粘稠，不容易过滤，需要加大量缓冲液稀释后过滤，离心才能得到细胞。至于细胞形态，觉得组织贴壁得到的梭型细胞多。

zxiaoxiao311

楼主的图片1和2是在相同倍数下照的吗？感觉酶消化法的细胞要大得多。楼主的细胞三代就开始老化现象，主要指的是什么，长得慢？细胞形态有所变化？

henryjia

# T* \6 z& P+ z
1 i) J) k/ z; T+ \, e$ G9 [" N1 ]回复 农夫有点田 的帖子
  K! m( S/ ^  {8 W& z9 A' h" J: }# W
$ ?, n' m5 n$ X, q我用的胶原酶都是当天配置的（使用浓度1mg/ml or 2mg/ml，溶解于低糖DMEM中），可是消化效果很慢。 请问您使用什么试剂配置的呢？我的胶原酶I型是SIGMA买的。

meister

看上去不错。
9 R( F4 T- @# S2 K/ p* r8 ]消化困难的也是干细胞，不过形态扁平，比较老化，诱导分化困难，可以舍弃。

农夫有点田

我只做脐带间充质干细胞的分离 没楼主知识面广 但是看了您的胶原酶时间消化6h 是不是太长了呢？我做的是不超过60分  如果酶是新配的 活性很强的话 就缩短些 个人经验 仅供参考