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本帖最后由 henryjia 于 2011-12-2 08:04 编辑
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# p6 K/ F% @1 \做脐带间充质干细胞的分离有差不多1年了,在此分享一下自己的经验,同时,抛砖引玉,希望大家多提宝贵意见,以完善这个主题研究信息。! [) c3 _ z P- s6 F; z5 ?
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先说细胞分离:比对很对方法后,感觉I型胶原酶联合透明质酸酶消化最理想。但是仍然个体差异性非常明显。 而且这个方法不能过扩展到脐带动静血管的消化。
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% f2 h) o6 c4 j6 ^2 j) d其次,消化法时掌握不好消化时间,看文献有的说消化过夜,有的说6h的。一直不成功,仍然个体差异性非常明显。过夜消化似乎对细胞损害很大,不知道添加少量血清是否有保护作用。
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培养基:使用含10%血清的骨髓MSC相同培养基,发现很快(3代左右)细胞老化明显,及时添加bFGF也不能阻止。
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' o; k( f6 t# I9 k2 k1 h传代:一直使用0.25%胰酶加EDTA(SIGMA),必须要用含血清培养基中和。感觉效果还行。同样有不少细胞贴壁很难弄下来。请问,这部分细胞是不是干细胞?要还是不要呢?9 T% Q, v: d! x% m% G' j
0 C8 `# m: d% `: e多分化潜能的功能测试:这是最头痛的,与骨髓MSC相比,结果简直就是成纤维细胞,根本不像MSC。即使之前FACS表面抗原CD90,CD105, VACAM与MSC很接近。 成脂成骨作用很弱,不知道大火的结果如何?真如报道的那么好吗?我怎么做不出来?' ?" r8 U, Y" n$ n; c& V
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附上我的细胞照片:! m7 n/ H2 P- d5 @
图1是直接贴壁
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图2是酶消化
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, b2 b; L! T7 T# O7 y/ X) @图3, 是否是平滑肌细胞呢? 这是我从期待静脉内层剥离的组织消化培养出来的。
/ Q7 V2 V: z; w- [, h9 z6 ~3 E% V感觉当时是有华通胶混杂其中,但是细胞形态均一。很奇怪。最初目的是分离脐静脉平滑肌细胞。1 L5 W U6 [2 m, j9 Z
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