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本帖最后由 henryjia 于 2011-12-2 08:04 编辑
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2 s) u! B% r* s2 z7 y' f& W做脐带间充质干细胞的分离有差不多1年了,在此分享一下自己的经验,同时,抛砖引玉,希望大家多提宝贵意见,以完善这个主题研究信息。
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先说细胞分离:比对很对方法后,感觉I型胶原酶联合透明质酸酶消化最理想。但是仍然个体差异性非常明显。 而且这个方法不能过扩展到脐带动静血管的消化。 r1 t. L$ N/ ~. c& W. p
. E& W* W$ S. h" @0 P) Z. s其次,消化法时掌握不好消化时间,看文献有的说消化过夜,有的说6h的。一直不成功,仍然个体差异性非常明显。过夜消化似乎对细胞损害很大,不知道添加少量血清是否有保护作用。0 f. |% K! @* e
$ X2 s; w: ^* V2 O& c( v培养基:使用含10%血清的骨髓MSC相同培养基,发现很快(3代左右)细胞老化明显,及时添加bFGF也不能阻止。
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传代:一直使用0.25%胰酶加EDTA(SIGMA),必须要用含血清培养基中和。感觉效果还行。同样有不少细胞贴壁很难弄下来。请问,这部分细胞是不是干细胞?要还是不要呢?
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' b# l W" U4 e; Y; u* m! t多分化潜能的功能测试:这是最头痛的,与骨髓MSC相比,结果简直就是成纤维细胞,根本不像MSC。即使之前FACS表面抗原CD90,CD105, VACAM与MSC很接近。 成脂成骨作用很弱,不知道大火的结果如何?真如报道的那么好吗?我怎么做不出来?
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5 w* P3 n! G, b; o1 V5 q附上我的细胞照片:
; S+ u% [9 y7 e' {' u) N! B图1是直接贴壁# k1 b$ s2 _3 w4 c j
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; `1 R% r, B( _图2是酶消化, ]( z- l& t7 W# N0 @+ ]
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图3, 是否是平滑肌细胞呢? 这是我从期待静脉内层剥离的组织消化培养出来的。
: Y1 _. [7 S1 }% ]; I" L& \8 N感觉当时是有华通胶混杂其中,但是细胞形态均一。很奇怪。最初目的是分离脐静脉平滑肌细胞。
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