综合讨论：脐带间充质干细胞的分离，传代和分化的问题

henryjia

回复 zxiaoxiao311 的帖子0 u- O" R8 i7 h6 b. D1 z# [
1 U+ Q5 R7 c) D7 U4 Z1 F) P& h9 @
生长慢，形态变化，变大，不规则

农夫有点田

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5 q% @: s/ _% C# J. ^9 h我买的是GIBCO 的 直接用去离子水配成1mg/ml

紫电苍炎

我们这边就是PBS直接配置 也是2mg/ml 但是我们这边的笑话时间只有60min！尝试过半小时 1小时  2小时以及过夜笑话！2小时的话细胞得率有增加大概10%的增加相较于1小时，但是隔夜消化的细胞就很少了！

henryjia

回复 紫电苍炎 的帖子; j# w6 r6 z* t8 L. x; o) g
" K- ~# m1 y& I" q9 @& F
60min能够消化完全吗？我尝试过，似乎很难？不知道一些论文中消化后，直接做细胞筛选是怎么实现的？/ s& S5 I- f4 G
7 Z) h" C9 K9 E! h. d
发表的论文比较经典的是，酶消化后，比重离心分离单核细胞后，用表面抗体标记细胞，之后进行筛选。这个过程至少要6-8个小时。细胞还能健康吗？我的细胞还没有复苏过来的，很苦闷！

zxcv12345

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  U( H/ X# g9 N! a0 V+ n. l, V! o- [+ Q" w% L
我们分离osteoblast时，半小时后，取走消化液PBS稀释，样品接着加新酶继续消化，感觉这里也可用这个方法吧。消化时间过长不好

sailree

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$ G; U8 a+ g& w. p8 |: u/ {' q$ ?( M, A& H  R6 H
组织块法

紫电苍炎

回复 henryjia 的帖子1 q. K, |, _8 g" V5 K% a2 W5 l$ p

7 N( W0 }; C; y$ d5 @3 m2 ^$ j; V不完全是绝对的，话说用不着消化那么完全吧！ 干细胞增殖能力那么强，只有有些微活细胞就足够了。你说的比重离心我们这边没有做...

henryjia

/ m% w/ W( j( Y4 E" D: S8 C最经看报道有从大隐静脉外膜提取干细胞，与心血管发生相关。正在尝试。
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上周比较了脐带静脉与动脉的消化，发现结果非常不同。相同消化条件下，脐带静脉细胞竟然很少有存活的！' v$ B, Q# K3 M, |, E

2 S* e' k4 J! i( o6 ?2 i8 a我理解细胞壁厚薄有区别，难道细胞类型也有区别吗？