请教MII期卵子染色体扩展

xiaomingxu

楼主的问题真的是一个很棘手的问题，我们也尝试过做MII期卵母细胞核型，但效果也是不理想。
8 g+ X0 }( f. I$ j" c: Q6 P7 A但可以就一些细节问题进行切磋：我们尝试的方法是，先AT去透明带，PBS清洗，然后，醋酸钠+BSA低渗（可以尝试KCL低渗），TW-20/HCL固定（楼主用甲醇：乙酸=3:1固定确实很剧烈，会发生卵母细胞找不到的情况，所以要尽量控制加的固定剂的量），后面常规操作，遇到的情况与你基本相同，有时可以见到完整的染色体，但有时染色体散的很开，也遇到染色体凝集在一起的情况。改进中......

xiaomingxu

回复 yahyo 的帖子; l4 V2 r2 d- I5 f1 ?; I6 |0 f0 L. D3 N

( L: u! W( \1 W& p- Q. S不知道你所说的成功率是指什么，如果只是看到核，那基本没什么问题的，如果要得到很好的分散染色体，那就比较低，大部分是分散度不好。

xiaomingxu

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+ g5 U* a9 G9 d  L- }/ Y, u
' c: a/ e0 f0 I) A4 @$ ^# e( a低渗液：1% （W/V）醋酸钠+0.6%BSA;时间5-10 min；
3 @7 S7 f& l/ H- d1 d固定液：10 ml 五蒸水中添加10ul的HCL 和10 ul的TW-20;时间要自己把握哦；) L( ^+ D! V, A) b+ n
AT是酸性Tyrode，去透明带用的，PH2.5，1min左右即可。
8 p, N) U. \# C3 o" @你们可以尝试一下，然后共同改进哦。

xiaomingxu

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1 `% |% N2 F, O* u. k
. k& U/ t: i8 B! g' r确实遇到这种情况，你可以用玻璃笔在玻片下面画一个很小的圈，然后把卵母细胞转移到其中，体视显微镜下操作。