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[请教] 免疫组化用TMB显色可行吗? [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-12-3 19:07 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近在做免疫组化,刚开始用DAB显色,做了几次感觉用普通的显微镜很难观察,显微镜的光造成的暗黄色的背景和显示出来的浅棕色很难区分,又考虑到DAB的毒性,于是改用了TMB显色,做了两次感觉效果好很多,一个一个的蓝色颗粒看得很清楚。1 a0 v, j* \7 m% z' o, R# m+ n
问题如下:1、用TMB显色可行吗? 用来发文章会被认同吗?SCI源的文章用这种显色方法做免疫组化的多吗?8 e) H" x. x- u3 F( G
2、我做了一个阴性对照(PBS)竟然也有很多蓝色的颗粒,难道是我用PBST洗片子的时候把
& q& u# k1 U' F& @& A它们放在一起洗造成的?" S0 }# ]$ T* \3 ?& L8 M) y5 J& H3 R
请有经验的朋友指点迷津,感激不尽!
) e, d" X( N4 D! H4 _
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沙发
发表于 2011-12-3 19:56 |只看该作者
TMB和DAB都是辣根过氧化物酶的底物,只要是能结合有二抗的地方,应该都能特异显色的。至于的的对照组中也存在有染色,可能原因,应该是非特异染色,或者像你说的放到一块洗造成的假阳性结果,或者说你的TMB试剂有问题。下一步你可以尝试着排除这三个方面的因素。
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藤椅
发表于 2011-12-3 20:37 |只看该作者
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谢谢这位朋友的意见,那其他问题呢?
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