RNA探针合成问题咨询

heiguzi1988

现要合成RNA探针，用SP6转录。但是操作过几次效果都不好。2 v2 h1 O. X; ?. m
分析原因有：DNA模板不纯，后经过试剂盒纯化处理（两次）260/230能到1.8以上。感觉应该合格。- k* {' K) T+ u
但是我查到一些论坛，说用来做RNA探针的DNA模板最好也去除RNASE。
3 _5 k" P) t2 }但纯化试剂盒的elution buffer应该就是普通的超纯水吧，不是RNAse-free的水，如之奈何？用这种DNA模板做出来的RNA探针，电泳图有好多散带且主带不亮，不知道是降解的原因还是啥原因。
1 m" X7 J- U2 S请问怎么纯化DNA模板至RNASE-FREE又纯度很高？是不是在最后一步加DEPC处理的水就行了，感觉还是不合适，因为试剂盒本不是为RNA所作。（我是想知道有什么传统方法？）, {7 V$ [% l& p' l* w; c' u
还有，需不需要再纯化RNA探针之后才能用来做杂交呢？
: |( {3 k4 B2 Y8 r, W3 f谢谢！