成骨诱导11天后Alizarin Red staining，求鉴定

hxf_86

# P7 a/ |# Q: T
, A6 f4 D! v6 l这是我成骨诱导11天后的钙结节染色，大概流程如下
) U+ A& {2 a2 m- |PBS洗2遍，95%酒精固定10min，ddH2O洗3遍，然后0.1%Alizarin Red染色（做了个时间梯度，分别是5,15,30min），然后ddH2O洗3遍，拍照。下面是图片，求各位大侠鉴定~谢谢~
5 h9 j7 I: h6 P2 S0 ~( ]染色30min-1* E! ]: @2 s0 C& `
染色30min-2
; D% d6 ~/ ]* a6 j5 C染色15min
$ d! @) g' M- G3 r2 N$ j染色5min

wangzhiqi86

不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

luoziwei

wangzhiqi86 发表于 2011-12-8 22:54 6 ~) m+ x. a4 B
不清楚为什么要用双氧水处理呢？固定洗涤后，直接染色就好了啊

; _+ {6 w: x9 a' L" |
大哥，那是ddH2O，是双蒸水，不是双氧水

luoziwei

楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到过这种染色。从我的经验来说，如果ph控制在5以下的话，就有60%的可能性不是的。

wangzhiqi86

回复 luoziwei 的帖子
% \3 p# l* M* |. `& h+ Z
3 z* {. a5 |( X' _3 m不好意思，看错了，我还纳闷，只有免疫组化里面才会用到双氧水啊。茜素红染色确实和染料的pH值有关

tjutiger

所用细胞是MSC么？11天就开始染色。。。

ljzmy82

MSC诱导分化吗，要是干细胞分化没有这么快的呀，得20天左右吧

细胞-77

回复 luoziwei 的帖子
. S+ }" k* z0 {/ c: G* j. |9 X" u7 e& Y, o. C. k
可否把你的茜素红试剂配制和染色步骤分享一下吗？谢谢

luoziwei

我已经在论坛里说了几次，都有详细步骤的，你可以查看看嘛

hxf_86

luoziwei 发表于 2011-12-9 10:03
2 A( k7 I+ ~  \) ?楼主是不是把茜素红染色液的pH调高了，偏碱性的染色就是不太正。不好说你的染色是不是钙结节，当然我也遇到 ...

& Q/ |0 u9 a+ E/ t% c; E
你好，谢谢你的回帖~我把PH调到8.3了。那请问你PH调到多少为合适呢？