高手请看过来，指点下

leehomaxun

刚开始养的iPSC，传代后第四天; o" z5 t5 {9 C( l# q. c' w9 w
我能意识到的是，MEFs有点稀6 g) ?' M# T. K* Y$ _' p: I
问题是：各个克隆大小一不，还有传代的时候没有摇匀，几个克隆靠太近都粘在一起了，有没有什么影响？- h6 A: S1 \* c/ ^) s
照片没有拍到的问题：培养液中漂浮着很多的死细胞，有没有影响？
6 @$ N9 L5 t, @- k3 @谢谢！

leehomaxun

echowdk

回复 leehomaxun 的帖子7 @. C5 ]! K& ~- B" J
: a$ g7 `3 _, j8 `) q8 i
MEF太稀了。- y3 `6 |' ~, ?5 x* ^/ `8 l
克隆大小的话，我觉得普通ES细胞培养的时候，也会是这样：一个皿里的细胞克隆有大有小，所以不是问题。克隆靠太近也没啥关系，看细胞长得差不多的时候赶快传代吧，不要让它们都连上。但是一般来说，ES细胞传代培养后，克隆形态会变好一些的，所以不用担心。
3 \' r5 l; u1 x. }4 F2 Q培养液中有悬浮死细胞的话，有可能是因为你的克隆大小已经到了可以传代的大小了。如果你不传代，继续让它生长，它就会死。我们实验室有个品系的ES细胞是这样，所以我猜测着差不多你这也一样。

歪歪

感觉ES已经分化了，克隆太大了，mef太稀了

wangyimei

feeder密度是稀了点，但是还好，在换液的时候可以补充加一些CM培养液，
, @* x/ {" A, A& D! G/ u3 O0 Z至于克隆都融合了，是不太好，下次还是注意一下要摇匀一些
  Y  e. l- E5 ?: x至于漂浮的死细胞有一些也是正常的，因为随着克隆的不断长大增厚，会有一些细胞被挤下来飘到液体中的

wangyimei

不过想问一下你用的这个饲养层是哪个品系的小鼠的？

leehomaxun

回复 wangyimei 的帖子# h1 h7 |4 G6 r4 B9 B
/ v; u, R0 O7 M
我们实验室的MEFs都是从外面直接购买使用的，我调查下，再来回复。$ r  s) w' l( C" X5 t+ A1 k* b

$ `4 O. Q( U: h# Y谢谢各位的解说。

leehomaxun

回复 wangyimei 的帖子9 [9 _) x5 F- D4 M# i

5 J: F" ^' N8 Tthe mice strain is CF-1 from Charles river. the product number is 24101243.

wangyimei

回复 leehomaxun 的帖子
) Y9 m* g4 M0 T' a( k* I
% [- H* Y- a2 \谢谢