高手请看过来，指点下

leehomaxun

刚开始养的iPSC，传代后第四天8 a0 j. h( H2 w2 \
我能意识到的是，MEFs有点稀
) ]3 _# O: B( w. m问题是：各个克隆大小一不，还有传代的时候没有摇匀，几个克隆靠太近都粘在一起了，有没有什么影响？/ s* v) F$ S1 i. w% s
照片没有拍到的问题：培养液中漂浮着很多的死细胞，有没有影响？: n8 N) {1 ]4 M! X/ A
谢谢！

leehomaxun

echowdk

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+ D' r! x. m3 j% Q; U$ w! D4 f. y
0 n- B% e% G; v, s. l' g7 tMEF太稀了。8 N' l# v( _9 g7 X* T3 v4 Z# Q
克隆大小的话，我觉得普通ES细胞培养的时候，也会是这样：一个皿里的细胞克隆有大有小，所以不是问题。克隆靠太近也没啥关系，看细胞长得差不多的时候赶快传代吧，不要让它们都连上。但是一般来说，ES细胞传代培养后，克隆形态会变好一些的，所以不用担心。) z6 g3 e) b4 C) O0 V7 o
培养液中有悬浮死细胞的话，有可能是因为你的克隆大小已经到了可以传代的大小了。如果你不传代，继续让它生长，它就会死。我们实验室有个品系的ES细胞是这样，所以我猜测着差不多你这也一样。

歪歪

感觉ES已经分化了，克隆太大了，mef太稀了

wangyimei

feeder密度是稀了点，但是还好，在换液的时候可以补充加一些CM培养液，
& @4 A" h" F6 Z至于克隆都融合了，是不太好，下次还是注意一下要摇匀一些; _+ H% N; m; c1 C
至于漂浮的死细胞有一些也是正常的，因为随着克隆的不断长大增厚，会有一些细胞被挤下来飘到液体中的

wangyimei

不过想问一下你用的这个饲养层是哪个品系的小鼠的？

leehomaxun

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' C( |* N6 B; B: R7 {
4 c$ E; l$ j$ y我们实验室的MEFs都是从外面直接购买使用的，我调查下，再来回复。
- }8 W' B( D# b7 K) u# u+ w" t" F
. \" Z5 y: s. z$ [$ I谢谢各位的解说。

leehomaxun

回复 wangyimei 的帖子9 i9 }; Y; ?& M
- C: T4 B0 d  b8 F3 D& o: q. Q/ x
the mice strain is CF-1 from Charles river. the product number is 24101243.

wangyimei

回复 leehomaxun 的帖子. n, _9 t/ O  Q) P: o6 W
& s0 P4 K, Q) |5 `- C+ h6 c
谢谢