高手请看过来，指点下

leehomaxun

刚开始养的iPSC，传代后第四天3 L1 L& O5 t0 {& U
我能意识到的是，MEFs有点稀7 f3 U5 P% f* [4 t: N( W
问题是：各个克隆大小一不，还有传代的时候没有摇匀，几个克隆靠太近都粘在一起了，有没有什么影响？, @, h2 v; a3 e7 m6 H0 M% w& S1 K
照片没有拍到的问题：培养液中漂浮着很多的死细胞，有没有影响？
. U( z  p' y1 {9 x谢谢！

leehomaxun

echowdk

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0 Q7 _; ?, M* k9 q! J- a1 O* u: w/ @6 ?+ {5 M, a( m0 f! M$ k! k
MEF太稀了。% \$ r2 ?6 M& Z" Y( T) l
克隆大小的话，我觉得普通ES细胞培养的时候，也会是这样：一个皿里的细胞克隆有大有小，所以不是问题。克隆靠太近也没啥关系，看细胞长得差不多的时候赶快传代吧，不要让它们都连上。但是一般来说，ES细胞传代培养后，克隆形态会变好一些的，所以不用担心。, [6 J- h. C( G# k5 R
培养液中有悬浮死细胞的话，有可能是因为你的克隆大小已经到了可以传代的大小了。如果你不传代，继续让它生长，它就会死。我们实验室有个品系的ES细胞是这样，所以我猜测着差不多你这也一样。

歪歪

感觉ES已经分化了，克隆太大了，mef太稀了

wangyimei

feeder密度是稀了点，但是还好，在换液的时候可以补充加一些CM培养液，* Q5 @# K  }, b' E3 B1 |; y
至于克隆都融合了，是不太好，下次还是注意一下要摇匀一些6 k7 t! I4 T/ J7 V! k
至于漂浮的死细胞有一些也是正常的，因为随着克隆的不断长大增厚，会有一些细胞被挤下来飘到液体中的

wangyimei

不过想问一下你用的这个饲养层是哪个品系的小鼠的？

leehomaxun

回复 wangyimei 的帖子5 v: F) G" t* _

8 i- N0 N0 Q7 ~" t9 W) v* c% j我们实验室的MEFs都是从外面直接购买使用的，我调查下，再来回复。
+ D) D6 z/ D0 _: S  J0 g7 S/ B" x  \" A& W/ _$ V
谢谢各位的解说。

leehomaxun

回复 wangyimei 的帖子
2 Y6 I: [' l9 O- [9 C/ x/ C
) p+ J& j: p- w' ?: ithe mice strain is CF-1 from Charles river. the product number is 24101243.

wangyimei

回复 leehomaxun 的帖子. S& {6 d/ \, L% y0 k

! |0 K. S" i2 L0 i: T( {谢谢