请教，如何确认小鼠胚胎干细胞建系成功

lhw7514093

如题，如何确定自己提取的小鼠胚胎干细胞建系成功。

yangpan521

做鉴定，如干细胞表达的基因、嵌合体、等很多的标准

zpzp0312

首先形态是最基本的
. B1 q( Y. A5 ^7 ^6 y0 b6 n9 Z其次是一些能够表现出来的指标：碱性磷酸酶，免疫染色，核型分析7 r" q( A/ U' J
分化指标：类胚体，畸胎瘤，具有种系传递的嵌合体小鼠

zpzp0312

首先形态是最基本的" w" W+ s6 d( p6 Y5 k* h
其次是一些能够表现出来的指标：碱性磷酸酶，免疫染色，核型分析" [. ?% ]# q3 n( T
分化指标：类胚体，畸胎瘤，具有种系传递的嵌合体小鼠

lhw7514093

已经得到嵌合体小鼠，而且得到F1代小鼠了，算是已经建系成功了吗？

zpzp0312

) h5 `7 b) f/ P. r! B1 Q; C5 ^

- o; g$ H  Z7 D8 U5 F4 H回复 lhw7514093 的帖子
0 G! N& ^, O) |2 ^2 w! R6 L! @: R  t5 N
基本算是吧& e0 s, E1 H4 q% m1 @1 m: Q
但我上面所说的指标还是需要检测一下的
! X6 P# G* U2 p, c% N其实最好还是做四倍体互补得到ES小鼠，只要保证每只孕鼠都能产出ES小鼠，那应该是真的没什么问题了！" T2 v$ B6 S, M& U
ES小鼠是黄金标准
, S( U6 ~% ^% \

zpzp0312

另外请教一个问题
  b7 P! F7 L+ r( n+ O& w' B! H楼主的ＥＳ细胞具体遗传背景是什么啊？
$ k* M2 F/ Z$ S2 G8 n囊胚是由哪两个品系的小鼠交配得到的？- C/ K2 h, h  I0 e+ x: W. ]
另外受体胚胎是什么品系啊？就是把干细胞注射到什么品系的胚胎里啊？
3 q: V! \  k& O$ x- b/ i) f& [请教

lhw7514093

ES细胞黑B6，受体囊胚是ICR，但是效果不好

zpzp0312

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4 |" O5 i1 ~/ a* U! o) B
' p1 e# \( n8 w5 W4 u9 Q. H+ {2 {% z) f嵌合体比较容易制备，但制备ES小鼠可有难度
2 j% U9 C1 D2 H5 A4 [B6的细胞稳定性差，不已发育至足孕4 p$ W. {0 G( w

9 F9 L4 K, A4 Q  [: g) B: W另外，问一下楼主的嵌合体种系传递有没有发生？实事求是! W0 I1 K3 r7 E

cicadacjk

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8 n8 K& p7 d- P" [/ u6 n0 p  M+ `! \9 c* q+ r! e" [
四倍体做到每只孕鼠都出ES小鼠，太厉害了/ U. _5 s& r$ {* g/ v3 B. I. s
我读文献大概是2%-4%之间，一只孕鼠移植15个囊胚，感觉很难，限于技术问题，我们最好的细胞也就1%上下
& F3 L! ~7 Z0 t! L请问你们是如何达到这么高效率的？