请教，如何确认小鼠胚胎干细胞建系成功

lhw7514093

如题，如何确定自己提取的小鼠胚胎干细胞建系成功。

yangpan521

做鉴定，如干细胞表达的基因、嵌合体、等很多的标准

zpzp0312

首先形态是最基本的
# O. P- B; a$ \1 a其次是一些能够表现出来的指标：碱性磷酸酶，免疫染色，核型分析; G9 d, W, s- M9 M. S
分化指标：类胚体，畸胎瘤，具有种系传递的嵌合体小鼠

zpzp0312

首先形态是最基本的3 k0 ~9 d2 Z0 T" Z& k/ }, t  G
其次是一些能够表现出来的指标：碱性磷酸酶，免疫染色，核型分析
! o! G0 Q2 r! ~/ I1 r7 K/ H分化指标：类胚体，畸胎瘤，具有种系传递的嵌合体小鼠

lhw7514093

已经得到嵌合体小鼠，而且得到F1代小鼠了，算是已经建系成功了吗？

zpzp0312

5 a3 A2 u& f( T2 u4 u9 G  s8 g( u# q
回复 lhw7514093 的帖子/ L; i" I* h! @; ~7 I# K
; j5 U; g1 o; g# \& z, \% s
基本算是吧, f# q  K/ h9 Z
但我上面所说的指标还是需要检测一下的0 B' J* R- ]  Q, L* L* e" P
其实最好还是做四倍体互补得到ES小鼠，只要保证每只孕鼠都能产出ES小鼠，那应该是真的没什么问题了！8 g  v" E, D2 ~: j1 f" Q0 j
ES小鼠是黄金标准0 q5 x! T* [. k

zpzp0312

另外请教一个问题5 ?4 W5 i1 i1 T" M
楼主的ＥＳ细胞具体遗传背景是什么啊？. R7 S% A8 x7 L+ F6 e2 R
囊胚是由哪两个品系的小鼠交配得到的？% ^& n# W/ e1 O1 r; A/ D+ K
另外受体胚胎是什么品系啊？就是把干细胞注射到什么品系的胚胎里啊？
- b, [1 h% G8 _1 r% R( U, x& p/ S, u) t请教

lhw7514093

ES细胞黑B6，受体囊胚是ICR，但是效果不好

zpzp0312

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- o* V5 g: Z' K/ P; e& u6 v5 v) {2 p# y9 U; N1 L) p5 a+ a
嵌合体比较容易制备，但制备ES小鼠可有难度
9 Z+ h+ _3 j: DB6的细胞稳定性差，不已发育至足孕
4 F% l7 z$ d$ d" U% s2 |
: R( X6 Y# d) ~* A3 N另外，问一下楼主的嵌合体种系传递有没有发生？实事求是
% Z. d0 A1 }6 e# u6 R

cicadacjk

回复 zpzp0312 的帖子8 C) C9 S  R! [3 C. h& V

3 L6 c2 m9 U' {$ x6 m. X( \四倍体做到每只孕鼠都出ES小鼠，太厉害了$ g! t  U/ ]" A8 E- n# @
我读文献大概是2%-4%之间，一只孕鼠移植15个囊胚，感觉很难，限于技术问题，我们最好的细胞也就1%上下
* T. S* @* h# y: `请问你们是如何达到这么高效率的？