求助：关于Western Blotting

轩辕之客

( Q2 j2 W( c* O# G" G1 p; `7 K( ?" U& d, {0 D
我们实验室以前没做过“Western Blotting”，要开始做的话需要做哪些准备啊，哪些耗材和仪器是必须的啊。还有这些产品哪些公司的比较好啊！求推荐！
' S, ^; G* ~( b5 e6 ~问题有点小白，望细心的人指导下！
5 O7 U3 X* T. `. C9 }2 o9 X% \" b- A( }: {/ N7 J" A* f6 A
顺便求一份详细点的Western Blotting protocol！5 n8 m2 p, R% x4 o. }5 z
* b3 d' ~  i7 T# N
谢谢

limeiying

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* Y+ V& Y( `; j希望能帮到你

limeiying

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轩辕之客

谢谢，很有用！！

kostarcell

楼主 ：7 @' Y$ I! l5 o. j3 N* ~. ^9 S
我大致和你说一下，如果有不妥的别的同学还会补充。
4 X3 q9 z( A6 H4 G& q空间上讲分为两大部分：1，跑胶2，曝光。
) L& {' X) W! _) l  p" i' c% N$ Q大家通常做的就是1，跑胶都在常规的实验室完成。2，曝光要在暗室完成（有的实验室条件更好，有那种可以检测western化学发光的成像仪，也就不需要暗室了）
5 F/ c. e: B) F7 Q1，跑胶----western 制胶 电泳 和转膜 ----主要这3部分，常用的就是biorad 伯乐，产品你自己搜吧。耗材就是膜和SDS-PAGE的化学试剂。- T# D  I+ t$ h2 Y0 ^
2，曝光----X光片和自动洗片的机器---主要是柯达的产品。
# u) X* c  c2 l, y% C上面有同学给你攻略了，我没有下来看，估计没什么问题，我说的都是硬件，不知道能不能帮上你，实验其实不难，但想做的完美，条带清晰漂亮就不是简单的事情了，你多做才能有体会。
0 j. m! h; ]  D+ g5 }" P有写的不对的地方，大家多指正！

ilovelife

楼上说的都对。我只是再细化或强调几点：3 Z8 h1 P9 k3 _  U/ W7 w% u* e
1.关于转膜，可以干转、半干转或湿转。其中湿转最简单了，也不需要额外的仪器，只要转膜用那套夹板就可以了。膜可以是硝酸纤维素膜，也可以是PVDF膜，我比较喜欢后者。注意转膜最好在4度进行，降低蛋白降解可能性。! L# X! U3 @& E( C) L
2. 关于抗体，需要一抗和二抗，相对比较费钱，但也还好，有些抗体可以回收，重复用几次都还有效。
. |" z8 F# N- x+ ^% K3.关于显色，可以用楼上是说的化学发光检测法，如用CDP-Star、ECL等，也可以用传统的化学显色法，如AEC、DAB等等。( z) Y5 [8 M; y' v
以上只是我的一点经验，并不完全，也不一定有最新发展出来的技术先进，仅供参考。