求助：关于Western Blotting

轩辕之客

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我们实验室以前没做过“Western Blotting”，要开始做的话需要做哪些准备啊，哪些耗材和仪器是必须的啊。还有这些产品哪些公司的比较好啊！求推荐！
0 o! `( j5 N  m. z* ^, T; F问题有点小白，望细心的人指导下！
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顺便求一份详细点的Western Blotting protocol！
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谢谢

limeiying

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& ^' a( K" H* z希望能帮到你

limeiying

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轩辕之客

谢谢，很有用！！

kostarcell

楼主 ：' Q3 V% I% q. w! ?1 {
我大致和你说一下，如果有不妥的别的同学还会补充。5 u" g0 p/ m  n7 g1 e& [
空间上讲分为两大部分：1，跑胶2，曝光。$ U" m* o, m* `( t
大家通常做的就是1，跑胶都在常规的实验室完成。2，曝光要在暗室完成（有的实验室条件更好，有那种可以检测western化学发光的成像仪，也就不需要暗室了）0 [3 o' c( |& `9 P8 r- y; a
1，跑胶----western 制胶 电泳 和转膜 ----主要这3部分，常用的就是biorad 伯乐，产品你自己搜吧。耗材就是膜和SDS-PAGE的化学试剂。8 R$ O# h' e3 d2 K1 n
2，曝光----X光片和自动洗片的机器---主要是柯达的产品。8 o4 b0 l8 R3 L, `1 e6 Z# D8 B
上面有同学给你攻略了，我没有下来看，估计没什么问题，我说的都是硬件，不知道能不能帮上你，实验其实不难，但想做的完美，条带清晰漂亮就不是简单的事情了，你多做才能有体会。
$ _0 b6 a! a* q& S有写的不对的地方，大家多指正！

ilovelife

楼上说的都对。我只是再细化或强调几点：
# V* ^3 p. b9 r: T, G1.关于转膜，可以干转、半干转或湿转。其中湿转最简单了，也不需要额外的仪器，只要转膜用那套夹板就可以了。膜可以是硝酸纤维素膜，也可以是PVDF膜，我比较喜欢后者。注意转膜最好在4度进行，降低蛋白降解可能性。+ p5 u+ Z* c0 ]! j* D, c3 Z
2. 关于抗体，需要一抗和二抗，相对比较费钱，但也还好，有些抗体可以回收，重复用几次都还有效。0 y% X7 O! `0 G
3.关于显色，可以用楼上是说的化学发光检测法，如用CDP-Star、ECL等，也可以用传统的化学显色法，如AEC、DAB等等。0 z" g* {( [& v' b2 K$ g
以上只是我的一点经验，并不完全，也不一定有最新发展出来的技术先进，仅供参考。