求助：关于Western Blotting

轩辕之客

) H# f' Z8 J- j, W4 x, L
' T& H0 \( g* L( z, n) m+ X: _我们实验室以前没做过“Western Blotting”，要开始做的话需要做哪些准备啊，哪些耗材和仪器是必须的啊。还有这些产品哪些公司的比较好啊！求推荐！( Y+ o2 w% i& l6 {7 `' Z
问题有点小白，望细心的人指导下！
5 [" B, r* _' @( P( r4 {5 B$ z% o3 N9 C, Z- V" H6 p- q# H% |
顺便求一份详细点的Western Blotting protocol！
$ h& J5 y3 S* P% Z$ R# w, h' p- q; ]. ~
谢谢

limeiying

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9 F) `5 B8 P: b7 D: I( p: ?( `! c( D, K" @# \
希望能帮到你

limeiying

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轩辕之客

谢谢，很有用！！

kostarcell

楼主 ：* {/ g: A, B! H# x
我大致和你说一下，如果有不妥的别的同学还会补充。
: H! e0 ^. b" S0 K% q& ?空间上讲分为两大部分：1，跑胶2，曝光。: a# }, l  _3 C' a8 P/ z/ P/ m
大家通常做的就是1，跑胶都在常规的实验室完成。2，曝光要在暗室完成（有的实验室条件更好，有那种可以检测western化学发光的成像仪，也就不需要暗室了）) ^' }2 w' U. i$ ?8 n) H
1，跑胶----western 制胶 电泳 和转膜 ----主要这3部分，常用的就是biorad 伯乐，产品你自己搜吧。耗材就是膜和SDS-PAGE的化学试剂。
1 Y5 f; [3 W' L' K1 o0 [2 v( _2，曝光----X光片和自动洗片的机器---主要是柯达的产品。
) B; I' J5 ?" h- |上面有同学给你攻略了，我没有下来看，估计没什么问题，我说的都是硬件，不知道能不能帮上你，实验其实不难，但想做的完美，条带清晰漂亮就不是简单的事情了，你多做才能有体会。  Z1 @1 |' H7 s# W% M
有写的不对的地方，大家多指正！

ilovelife

楼上说的都对。我只是再细化或强调几点：7 f. V) G3 ?0 e8 ~) m0 }
1.关于转膜，可以干转、半干转或湿转。其中湿转最简单了，也不需要额外的仪器，只要转膜用那套夹板就可以了。膜可以是硝酸纤维素膜，也可以是PVDF膜，我比较喜欢后者。注意转膜最好在4度进行，降低蛋白降解可能性。
  k5 P( g6 n, k$ d2 Z: [+ B6 y2. 关于抗体，需要一抗和二抗，相对比较费钱，但也还好，有些抗体可以回收，重复用几次都还有效。3 F$ g* s, c& |7 B1 |4 I. n
3.关于显色，可以用楼上是说的化学发光检测法，如用CDP-Star、ECL等，也可以用传统的化学显色法，如AEC、DAB等等。
5 Z8 [8 V8 q' y  y1 ?% J1 [- u以上只是我的一点经验，并不完全，也不一定有最新发展出来的技术先进，仅供参考。