求助：关于Western Blotting

轩辕之客

  v5 a5 D% k" v. @& R4 y; s
+ v6 q% y0 h' a/ r8 k我们实验室以前没做过“Western Blotting”，要开始做的话需要做哪些准备啊，哪些耗材和仪器是必须的啊。还有这些产品哪些公司的比较好啊！求推荐！
0 e4 M1 O+ R. v  c问题有点小白，望细心的人指导下！
2 Q1 [% w- O4 Y0 `; A  U' R' x" H" @( ~+ _- H' U/ N
顺便求一份详细点的Western Blotting protocol！
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谢谢

limeiying

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3 U& _  z8 w& _! N% H" n" s  Q: C+ \- m3 r& b: N
希望能帮到你

limeiying

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轩辕之客

谢谢，很有用！！

kostarcell

楼主 ：) z3 A' Q) g6 b& K: |
我大致和你说一下，如果有不妥的别的同学还会补充。# {7 k% c; b& u4 p6 V
空间上讲分为两大部分：1，跑胶2，曝光。" G. A# I( [6 k% Y( M0 ~4 T$ W! l
大家通常做的就是1，跑胶都在常规的实验室完成。2，曝光要在暗室完成（有的实验室条件更好，有那种可以检测western化学发光的成像仪，也就不需要暗室了）
- J' c$ r# O* }0 g' B, g9 ?# e1，跑胶----western 制胶 电泳 和转膜 ----主要这3部分，常用的就是biorad 伯乐，产品你自己搜吧。耗材就是膜和SDS-PAGE的化学试剂。. G+ X2 d3 X+ w
2，曝光----X光片和自动洗片的机器---主要是柯达的产品。% m6 Q0 d$ Y( r3 k4 v5 L3 H
上面有同学给你攻略了，我没有下来看，估计没什么问题，我说的都是硬件，不知道能不能帮上你，实验其实不难，但想做的完美，条带清晰漂亮就不是简单的事情了，你多做才能有体会。6 d$ U$ I5 X6 K- L/ I; B0 i
有写的不对的地方，大家多指正！

ilovelife

楼上说的都对。我只是再细化或强调几点：  j4 g: b2 j: _9 F' h# H7 H( w
1.关于转膜，可以干转、半干转或湿转。其中湿转最简单了，也不需要额外的仪器，只要转膜用那套夹板就可以了。膜可以是硝酸纤维素膜，也可以是PVDF膜，我比较喜欢后者。注意转膜最好在4度进行，降低蛋白降解可能性。
* E9 M5 ~% p$ {  p3 ?& [1 b* t2. 关于抗体，需要一抗和二抗，相对比较费钱，但也还好，有些抗体可以回收，重复用几次都还有效。
' Q' g( ~# y6 [- {8 F7 {  q3.关于显色，可以用楼上是说的化学发光检测法，如用CDP-Star、ECL等，也可以用传统的化学显色法，如AEC、DAB等等。
1 P* y3 ^: [; C$ k; k9 C以上只是我的一点经验，并不完全，也不一定有最新发展出来的技术先进，仅供参考。