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歪歪

版主

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楼主

发表于 2011-12-26 21:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

问大家一些问题，我养的ES细胞，可能是传代的时候，有些没吹成单细胞，或者是细胞受损伤程度不一样，长了一天后细胞有些克隆长的挺大的，大部分都还是单细胞，没见到明显克隆，但等到第二天，大部分见克隆的时候，很多克隆太大都已经分化了。求教我该怎么搞

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sanfa

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沙发

发表于 2011-12-26 21:17 |只看该作者

多消化会都吹成单个细胞保证克隆大小一致

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meiying3061

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藤椅

发表于 2011-12-27 10:00 |只看该作者

我都是吹100多下，尽量吹成单细胞，吹均匀些

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lindan666666

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板凳

发表于 2011-12-27 15:52 |只看该作者

你是用0.125%的T/E消化吗？新的胰酶的话，三分钟足够了，用枪吹打几十次，确保细胞分散均匀。吹打细胞后可以在显微镜下看看，如果不分散可以继续吹散哦，否则就容易出现你的这种情况，部分细胞先老化，部分细胞还很小。培养液应该加了LIF吧

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lixf

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报纸

发表于 2011-12-30 17:58 |只看该作者

用0.25的胰酶消化3-4min,克隆就基本全飘起来了，若克隆是成块飘起来的，你就轻轻地磕一磕，可能就散成单个的了，然后终止收集就可以了
建议传代过程中尽量避免用机械操作将克隆吹散，这样对细胞的伤害是很大的。

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w小会子

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地板

发表于 2012-3-14 16:32 |只看该作者

容易分化有很多的原因，饲养层，营养液。。。

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