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(汇总)常用试剂保存条件:   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-12-28 17:11 |只看该作者 |正序浏览 |打印
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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-12-29 00:20 编辑 ) M9 N% B, a7 e. O4 S* G! k
% r: m4 E3 H% J! B& w/ V) \
期望大家把自己实验室使用过常用细胞培养试剂,包括名称,及配制方法、用量及保存条件分享交流一下。
6 U7 ]" Q7 v+ m, C: \我先来bFGF,MEM稀释,50ng/ml,4度避光保存。
9 M0 Z  n# w2 R6 x2 Y# o( o: q; E- I3 u           DMSO,分装小冻存管5ML一管,按需使用,与完全培养基配成10%,4度平衡30分钟。
. e* z- J* V' T* Y! y; u- n. }, Y           异丙醇,室温,无配制,避光保存。9 o7 k. J* Z: }' s
           青毒素,-20度保存,因为不用,具体量也不清楚。
0 T( l- g' t  g; a* m其它的希望大家来给补全,谢谢!      
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18楼
发表于 2012-2-10 16:13 |只看该作者
现在进口胎牛血清已经不需要灭活了,至于小牛血清和新生牛血清是否需要灭活还是需要咨询购买厂家。- X& O( k( O  J' k, ?; l8 f
但是楼上说的4℃溶解确实很重要,我们实验室已经反复验证了很多次,室温溶解的会产生蛋白沉淀的。500ml的溶解后分装包装一定很重要,避免污染和反复冻融影响效果。
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17楼
发表于 2012-2-10 15:12 |只看该作者
各种细胞因子应先配成使用浓度的500或1000倍,用DMEM或者PBS配制,配制过程要防止污染,因子一般都很少不用过滤,然后按50或100ul分装,-20度冻存,使用前室温化开,用完后马上冻于-20。, A, d# W2 p5 X6 c% l
谷氨酰胺一般按100倍配制,PBS或生理盐水配制,过0.22um滤膜,1.5mlEP管分装后-20冻存,使用前化开并混匀(低温时谷氨酰胺会重新变成粉末沉于管底),用完后马上冻存。
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16楼
发表于 2012-1-9 14:36 |只看该作者
本帖最后由 dongxin 于 2012-1-9 14:39 编辑 9 y5 C/ D5 F1 ^
" U2 W" p) s( s5 J2 V
补充两条# b9 Y- n6 v6 t$ w4 W
0.1%Gelatin: 0.5克Gelatin溶于500mLPBS,121度灭菌30分钟,4度保存备用。. Q3 m( V) T$ X" R4 L
Ⅳ胶原酶(5mg/mL):100mgⅣ胶原酶溶于20mL DMEM/F12,0.22微米过滤,分装存于-20度备用。
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15楼
发表于 2012-1-4 09:03 |只看该作者
回复 meridian 的帖子
4 `+ f1 k7 R3 h9 w
$ I) w( }% L+ F/ N, e' G3 _恩,是否需要其实问问厂家就行了……

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14楼
发表于 2011-12-30 11:40 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
+ }2 e% o7 Q/ \9 V1 }0 X
2 Y1 _; i& z$ `4 y  n" W: F是的。

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13楼
发表于 2011-12-30 10:21 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子3 P& y; M9 a( p0 d7 W. \

, H/ o# E: N/ j. F0 W# J对,是这样的。具体有什么样的讲究我也不清楚

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12楼
发表于 2011-12-30 10:02 |只看该作者
我们实验室谷氨酰胺统一配好后,根据配置培养液的用量进行分装。一般每支8ml,做好标记,放入-20度冰箱保存。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4度放置一周可降解50%。注意!
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11楼
发表于 2011-12-30 09:23 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
/ H( c6 Y- B6 j- y/ S9 _
2 O; q7 l* `: H也不见得,不是分细胞,而是购买的血清已经处理方式,一般是4℃溶解,57℃30 min灭菌,但是像我们使用的HyClone的南美胎牛血清就无需灭菌,只需4度溶解(很重要,不然室温溶解产生大量蛋白沉淀)
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10楼
发表于 2011-12-30 09:15 |只看该作者
回复 冰枫de梦 的帖子
: ]9 q" H. G' R) l" m3 J6 {3 h7 }% j9 [; Z8 x: M& b
不一定都要灭活吧,得分细胞类型,按需灭活
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