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(汇总)常用试剂保存条件:   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-12-28 17:11 |只看该作者 |正序浏览 |打印
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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-12-29 00:20 编辑
( i, ?) M* N: d2 P4 c' J
( i7 g# s* e& H* J8 G- H' C期望大家把自己实验室使用过常用细胞培养试剂,包括名称,及配制方法、用量及保存条件分享交流一下。0 ?7 }8 y/ r6 [7 s) t! {
我先来bFGF,MEM稀释,50ng/ml,4度避光保存。
( r( W* s0 ?8 ]9 F8 k) T; X4 p( z           DMSO,分装小冻存管5ML一管,按需使用,与完全培养基配成10%,4度平衡30分钟。- }! m+ ?' i% ~" `) }$ v- [
           异丙醇,室温,无配制,避光保存。# J9 ]) V$ _1 |- P0 k
           青毒素,-20度保存,因为不用,具体量也不清楚。9 X# p5 M$ f+ D& E& @& t
其它的希望大家来给补全,谢谢!      
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发表于 2012-2-10 16:13 |只看该作者
现在进口胎牛血清已经不需要灭活了,至于小牛血清和新生牛血清是否需要灭活还是需要咨询购买厂家。: a) G! |$ K) D. _9 j8 ^
但是楼上说的4℃溶解确实很重要,我们实验室已经反复验证了很多次,室温溶解的会产生蛋白沉淀的。500ml的溶解后分装包装一定很重要,避免污染和反复冻融影响效果。
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发表于 2012-2-10 15:12 |只看该作者
各种细胞因子应先配成使用浓度的500或1000倍,用DMEM或者PBS配制,配制过程要防止污染,因子一般都很少不用过滤,然后按50或100ul分装,-20度冻存,使用前室温化开,用完后马上冻于-20。
7 ]9 q2 m  m& S谷氨酰胺一般按100倍配制,PBS或生理盐水配制,过0.22um滤膜,1.5mlEP管分装后-20冻存,使用前化开并混匀(低温时谷氨酰胺会重新变成粉末沉于管底),用完后马上冻存。
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发表于 2012-1-9 14:36 |只看该作者
本帖最后由 dongxin 于 2012-1-9 14:39 编辑
1 w$ ~+ V/ H1 ]& [
9 D' V+ X- r% ]+ k1 d3 w补充两条% F1 W6 Y! p' g" ^9 U9 V- m1 a
0.1%Gelatin: 0.5克Gelatin溶于500mLPBS,121度灭菌30分钟,4度保存备用。
5 \+ ^8 W5 X- YⅣ胶原酶(5mg/mL):100mgⅣ胶原酶溶于20mL DMEM/F12,0.22微米过滤,分装存于-20度备用。
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发表于 2012-1-4 09:03 |只看该作者
回复 meridian 的帖子4 l- c3 o5 z9 |' ?4 F) z' `5 e/ f

! i: x3 D  V' C$ c& W. A恩,是否需要其实问问厂家就行了……

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发表于 2011-12-30 11:40 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
: ^0 t; v/ g( D8 v" J2 m+ A9 r% W% V8 ]' `) h3 a: i! z& G7 Y8 m0 N
是的。

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发表于 2011-12-30 10:21 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
* L' d6 q6 T. C, E7 @* U
; a: S+ _/ t. q4 z对,是这样的。具体有什么样的讲究我也不清楚

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发表于 2011-12-30 10:02 |只看该作者
我们实验室谷氨酰胺统一配好后,根据配置培养液的用量进行分装。一般每支8ml,做好标记,放入-20度冰箱保存。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4度放置一周可降解50%。注意!
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发表于 2011-12-30 09:23 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
. c- z) H  I  A3 t- e* b& Q+ I
, T9 ^0 Q9 \' J: O$ n5 k) t也不见得,不是分细胞,而是购买的血清已经处理方式,一般是4℃溶解,57℃30 min灭菌,但是像我们使用的HyClone的南美胎牛血清就无需灭菌,只需4度溶解(很重要,不然室温溶解产生大量蛋白沉淀)
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发表于 2011-12-30 09:15 |只看该作者
回复 冰枫de梦 的帖子
  t+ q; b+ A9 a1 H- q  m4 b4 E
; q) M6 |* I& G6 w: J9 A! S0 U不一定都要灭活吧,得分细胞类型,按需灭活
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