胎盘间充质干细胞分离方法

tkpss18

大家好，; j& [$ c/ G- D8 L& I
想请问一下在做胎盘间充质干细胞培养的前辈，你们一开始从胎盘分离干细胞的方法是什么？
; \7 P! E1 K" Z3 y/ x我们现在用的方法是先用组织处理器处理组织，然后用percoll分离单核细胞后直接培养。培养基是用DMEM/L12+FBS+L-Glutamine..但是这个方法出来的效果不太好，一般要等1个-2个星期才会有贴壁细胞养出来。麻烦大家可以提供一些意见给我吗？谢谢。

mozhibu

学习

wf78365421

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* L, D: G# S, k  o& u
7 T/ F- w$ n9 V这个原代培养时间长。

wf78365421

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0 Z. z; X0 o, Z( j2 K( O1 B
; J& S2 t* }/ J* r) }# n: ?! V用的什么组织处理器？

cantonchn

回复 tkpss18 的帖子  W! T/ o+ y2 h( [8 N

+ R' b( U0 B: j4 m4 t2 i( Y胎盘与脐带联接部位~~~实际就是脐带成分~~~

willow0711

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! @+ l( C1 Q2 e, ]' I0 d+ Y9 N  e" a" l$ Y/ _  [
请问你分离的是胎盘的哪个部分？胶原酶和胰酶的浓度是多少？谢谢！

硕果累累_555

分离胎盘MSC，用剪刀把胎盘剪碎，再用胶原酶和胰酶消化，消化2h就可以了。DMEM/F12较好使用。

孙帅帅

胎盘中贴壁细胞的分离与培养  无菌取胎盘胎儿面中心区域，0.1mol/L PBS液 (pH 7.4)冲洗去残血：① 酶消化培养法  剪碎后先使用胶原酶IV 37℃消化30min，再用胰蛋白酶消化10min，反复吹打使成单细胞悬液和外植块混合物，200目滤网过滤收集单细胞，小心置于淋巴细胞分离液上，2200r/min 离心15min获得单个核细胞，以1×106个/ml的密度悬浮于低糖DMEM培养基中（含15% FBS，100U/ml 青－链霉素），置37℃、 5% CO2和100％湿度培养箱培养，随后每3~4d换液1次，经3~4周可见成纤维细胞在瓶底汇合成片。 约到80％汇合时用0.25%胰蛋白酶消化，以细胞密度5×104个/cm2传代培养（这是找的一篇文献上的，我也没做过，我们是做脐带间充质干细胞的，你觉得可以的话你可以试一下。但是养脐带间充质干细胞我们是用的贴壁法，效果还是不错的！但是胶原酶IV比较贵你还是谨慎些好一些再查一下外国文献，胶原酶IV的常用剂量是200U/ml（约为1mg/ml）或0.03%~0.3%）

michellejo

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- W6 k" z0 c8 H7 R' ]/ A0 g: b4 S: {1 c9 p# q: g7 F
可以详细一点介绍一下你们的方法吗？

michellejo

回复 细胞海洋 的帖子, z/ [6 P0 N" e) x

) b# I; F6 E2 S3 P3 e谢谢