胎盘间充质干细胞分离方法

tkpss18

大家好，& [. v" g% S+ N: Y3 @
想请问一下在做胎盘间充质干细胞培养的前辈，你们一开始从胎盘分离干细胞的方法是什么？8 f" D) Q) M* g6 M. F6 t8 h4 J
我们现在用的方法是先用组织处理器处理组织，然后用percoll分离单核细胞后直接培养。培养基是用DMEM/L12+FBS+L-Glutamine..但是这个方法出来的效果不太好，一般要等1个-2个星期才会有贴壁细胞养出来。麻烦大家可以提供一些意见给我吗？谢谢。

liluli0715

分离胎盘的MSC，先用剪刀把胎盘剪碎，再用胶原酶消化，消化1-2h就可以了，然后用200目细胞筛过滤，离心后，可以直接加培养基培养。你的培养基是不是写错啦，DMEM/F12或是DMEM/L，这两种培养基是不同的。

liluli0715

我们实验室用的是α-MEM，10%FBS，没加生长任何生长因子，一般1-2天出现了贴壁细胞，2-3换液，10天左右融合到90%开始传代。现在细胞已传代第10代。

luobozongzi

我们实验室用的DMEM-LG+FBS 但是效果不好，percoll分离后哦诶样1周才能观察到贴壁细胞，而且不是每次都能培养出来2 H" S" e& q3 B8 f& {) V* W
后来试了DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺，效果好一点 ，3，4天就能看到贴壁细胞，而且全细胞有时也能培养出贴壁

tkpss18

回复 liluli0715 的帖子
# w4 M& ?9 c' Y: T3 G) g7 k0 X% Z' k/ s" t" e8 H
可以请教一些你们用的分离方法是什么吗？谢谢
( b# c8 o) j4 H9 z1 C( i

tkpss18

回复 liluli0715 的帖子6 M  ~* R: B$ h. y* N% \! j: q: J
! P9 ~# h$ q* [1 ^% i
不好意思，打错了，是F12。
1 h# u; `& V1 X* `6 Q$ K你们不会去红细胞吗？

tkpss18

还有其实还想问一下大家，胎盘的哪一个部分可以提取间充质干细胞的含量是最高的？: n' t& |, B# I  |9 v/ ]
谢谢。
6 Y) i3 r3 p! ?/ G

甯曦

我们是用的小叶，剪刀剪碎后胰酶处理，用DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺的培养基

xbqian

我们实验室是剪刀剪碎后，用低浓度胰酶胶原酶及透明质酸酶一起消化过夜，低糖DMEM/FBS培养，基本上三到五天搞定。

wappley

很不错的