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胎盘间充质干细胞分离方法   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-12-31 08:58 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,/ S5 X( _0 V, R! _. f! {: V2 Y
想请问一下在做胎盘间充质干细胞培养的前辈,你们一开始从胎盘分离干细胞的方法是什么?
1 Y/ L5 M, V1 L8 R9 q7 U& x0 B7 A我们现在用的方法是先用组织处理器处理组织,然后用percoll分离单核细胞后直接培养。培养基是用DMEM/L12+FBS+L-Glutamine..但是这个方法出来的效果不太好,一般要等1个-2个星期才会有贴壁细胞养出来。麻烦大家可以提供一些意见给我吗?谢谢。
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沙发
发表于 2011-12-31 09:13 |只看该作者
分离胎盘的MSC,先用剪刀把胎盘剪碎,再用胶原酶消化,消化1-2h就可以了,然后用200目细胞筛过滤,离心后,可以直接加培养基培养。你的培养基是不是写错啦,DMEM/F12或是DMEM/L,这两种培养基是不同的。
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藤椅
发表于 2011-12-31 09:18 |只看该作者
我们实验室用的是α-MEM,10%FBS,没加生长任何生长因子,一般1-2天出现了贴壁细胞,2-3换液,10天左右融合到90%开始传代。现在细胞已传代第10代。
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板凳
发表于 2011-12-31 09:28 |只看该作者
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我们实验室用的DMEM-LG+FBS 但是效果不好,percoll分离后哦诶样1周才能观察到贴壁细胞,而且不是每次都能培养出来4 t( ^, @& H/ I' `2 H- M
后来试了DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺,效果好一点 ,3,4天就能看到贴壁细胞,而且全细胞有时也能培养出贴壁
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报纸
发表于 2011-12-31 09:52 |只看该作者
回复 liluli0715 的帖子
% j% }" ~  h5 L1 m' a! Y) S$ t# h  W8 X( e" \& }) b6 y, d6 ]
可以请教一些你们用的分离方法是什么吗?谢谢1 j8 X1 E! {0 j- w, I

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地板
发表于 2011-12-31 09:53 |只看该作者
回复 liluli0715 的帖子
- @. I' c9 k9 h: Q
$ T4 r4 h% c2 ^8 F" d不好意思,打错了,是F12。) T5 d$ E& m' |) N
你们不会去红细胞吗?

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发表于 2011-12-31 10:10 |只看该作者
还有其实还想问一下大家,胎盘的哪一个部分可以提取间充质干细胞的含量是最高的?
9 v* Z4 o0 x4 x9 }谢谢。5 q# W8 W3 F& M* Y

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发表于 2012-1-29 10:52 |只看该作者
我们是用的小叶,剪刀剪碎后胰酶处理,用DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺的培养基
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金话筒 优秀会员

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发表于 2012-1-29 11:06 |只看该作者
我们实验室是剪刀剪碎后,用低浓度胰酶胶原酶及透明质酸酶一起消化过夜,低糖DMEM/FBS培养,基本上三到五天搞定。
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发表于 2012-1-29 11:39 |只看该作者
很不错的
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