干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 74175|回复: 35
go

胎盘间充质干细胞分离方法   [复制链接]

Rank: 1

积分
20 
威望
20  
包包
172  
楼主
发表于 2011-12-31 08:58 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,1 P+ p- }+ T$ p0 r0 b
想请问一下在做胎盘间充质干细胞培养的前辈,你们一开始从胎盘分离干细胞的方法是什么?, K$ u0 @+ Z; v6 `9 ^# z. G
我们现在用的方法是先用组织处理器处理组织,然后用percoll分离单核细胞后直接培养。培养基是用DMEM/L12+FBS+L-Glutamine..但是这个方法出来的效果不太好,一般要等1个-2个星期才会有贴壁细胞养出来。麻烦大家可以提供一些意见给我吗?谢谢。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
372 
威望
372  
包包
605  

金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2011-12-31 09:13 |只看该作者
分离胎盘的MSC,先用剪刀把胎盘剪碎,再用胶原酶消化,消化1-2h就可以了,然后用200目细胞筛过滤,离心后,可以直接加培养基培养。你的培养基是不是写错啦,DMEM/F12或是DMEM/L,这两种培养基是不同的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
372 
威望
372  
包包
605  

金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2011-12-31 09:18 |只看该作者
我们实验室用的是α-MEM,10%FBS,没加生长任何生长因子,一般1-2天出现了贴壁细胞,2-3换液,10天左右融合到90%开始传代。现在细胞已传代第10代。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
5  
包包
36  
板凳
发表于 2011-12-31 09:28 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
我们实验室用的DMEM-LG+FBS 但是效果不好,percoll分离后哦诶样1周才能观察到贴壁细胞,而且不是每次都能培养出来' x! K! X$ x8 t. B6 |
后来试了DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺,效果好一点 ,3,4天就能看到贴壁细胞,而且全细胞有时也能培养出贴壁
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
20 
威望
20  
包包
172  
报纸
发表于 2011-12-31 09:52 |只看该作者
回复 liluli0715 的帖子  B% y/ t/ M. M/ {9 I

" S" l' v  t7 r! z* h6 G" c可以请教一些你们用的分离方法是什么吗?谢谢- A6 ^# g2 c9 Z' S' m' b/ r( }

Rank: 1

积分
20 
威望
20  
包包
172  
地板
发表于 2011-12-31 09:53 |只看该作者
回复 liluli0715 的帖子
; K: {# V- K* R- ?1 k' O/ C' Q3 W# K4 f
不好意思,打错了,是F12。
" H; ]$ b# T: N# c3 B" D* a你们不会去红细胞吗?

Rank: 1

积分
20 
威望
20  
包包
172  
7
发表于 2011-12-31 10:10 |只看该作者
还有其实还想问一下大家,胎盘的哪一个部分可以提取间充质干细胞的含量是最高的?
. l5 i& ]# F+ T4 N- e( B3 |* u/ Z谢谢。' C; ~* B) Y% [1 `9 g/ {9 B, F5 U& V

Rank: 1

积分
威望
4  
包包
44  
8
发表于 2012-1-29 10:52 |只看该作者
我们是用的小叶,剪刀剪碎后胰酶处理,用DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺的培养基
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 4

积分
1065 
威望
1065  
包包
935  

金话筒 优秀会员

9
发表于 2012-1-29 11:06 |只看该作者
我们实验室是剪刀剪碎后,用低浓度胰酶胶原酶及透明质酸酶一起消化过夜,低糖DMEM/FBS培养,基本上三到五天搞定。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
0  
包包
3  
10
发表于 2012-1-29 11:39 |只看该作者
很不错的
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-18 08:01

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.