胎盘间充质干细胞分离方法

tkpss18

大家好，7 Y/ l! I( r* b8 W
想请问一下在做胎盘间充质干细胞培养的前辈，你们一开始从胎盘分离干细胞的方法是什么？! ^7 p4 b( }; C6 b/ B7 v+ O. o
我们现在用的方法是先用组织处理器处理组织，然后用percoll分离单核细胞后直接培养。培养基是用DMEM/L12+FBS+L-Glutamine..但是这个方法出来的效果不太好，一般要等1个-2个星期才会有贴壁细胞养出来。麻烦大家可以提供一些意见给我吗？谢谢。

liluli0715

分离胎盘的MSC，先用剪刀把胎盘剪碎，再用胶原酶消化，消化1-2h就可以了，然后用200目细胞筛过滤，离心后，可以直接加培养基培养。你的培养基是不是写错啦，DMEM/F12或是DMEM/L，这两种培养基是不同的。

liluli0715

我们实验室用的是α-MEM，10%FBS，没加生长任何生长因子，一般1-2天出现了贴壁细胞，2-3换液，10天左右融合到90%开始传代。现在细胞已传代第10代。

luobozongzi

我们实验室用的DMEM-LG+FBS 但是效果不好，percoll分离后哦诶样1周才能观察到贴壁细胞，而且不是每次都能培养出来
0 W# t: G6 R, g" I1 N8 k1 h: _- l" X后来试了DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺，效果好一点 ，3，4天就能看到贴壁细胞，而且全细胞有时也能培养出贴壁

tkpss18

回复 liluli0715 的帖子3 S4 m" @+ U& W7 \! g# t

' T) ^% {  F% G8 [4 [" r/ b: Q7 @可以请教一些你们用的分离方法是什么吗？谢谢1 ~& F: a" y$ h8 {+ s: t

tkpss18

回复 liluli0715 的帖子5 n- N1 d' `5 m: p2 k9 g  B

2 l" s' L* g8 \1 H9 C不好意思，打错了，是F12。
1 p5 i( ?5 }4 z2 d8 J. w( `+ H9 {你们不会去红细胞吗？

tkpss18

还有其实还想问一下大家，胎盘的哪一个部分可以提取间充质干细胞的含量是最高的？
! \' R/ B0 j" L谢谢。
) u. C& Y! ^6 p) G

甯曦

我们是用的小叶，剪刀剪碎后胰酶处理，用DMEM-F12+FBS+谷氨酰胺的培养基

xbqian

我们实验室是剪刀剪碎后，用低浓度胰酶胶原酶及透明质酸酶一起消化过夜，低糖DMEM/FBS培养，基本上三到五天搞定。

wappley

很不错的