脐带间充质干细胞的贴壁分离方法

xiaolong

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# i* I" g2 o$ y6 u1 E再谢谢啦

单个核细胞

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过夜我做过多次，没发现对细胞活性有影响。你也可以这样，刚贴完壁在每个贴壁的组织块上滴加一滴完全培养液，保持湿润就行，放置的目的主要是让组织块贴壁牢固，加入培养液后不至于漂起来。

xiaolong

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" b# u! z+ ~! g6 N再问，“在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液”，如果组织块在培养瓶中贴壁，组织块在培养瓶中裸露的时间太久了，是不是会影响组织细胞的活性？

xiaolong

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谢谢啊！

单个核细胞

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5 X  J* d! A$ \+ f. n0 G1 U( `" x* O2 }. U( c4 z" b( f3 w$ c
剥胶的时候，剥下来的华通胶直接放在50ml离心管内，全部剥完后剪碎，剪的过程中如果太黏，可以滴加少量PBS，不要滴太多。贴壁的时候用3ml吸管吸起组织，接种在培养瓶中。T75培养瓶每瓶贴20-25块，在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液。以后观察的时候动作要轻盈，尽量不要使组织块漂起。7-10天后，会有细胞爬出，可以去掉组织块补加新鲜培养液继续培养，等到局部间充质干细胞密集的时候，可以传代。

xiaolong

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) P: m1 c: x5 ~接种后，组织块有个贴壁的环节，贴壁效果好的，加培养液后，细胞会爬的很好，如果贴壁效果不好，组织块会漂在培养液里，细胞爬的效果很差，怎样能让组织块很好的贴壁？贴壁时间多久再加培养液会好些呢？

xiaolong

用过贴壁法，没用过酶消化法，所以没有比较过两者的效果哪个更好。不过对于贴壁法的看法，还是比较赞同“六楼”andreqin 的看法的。

shizhu198511

我酶消化法和组织块法都做过，酶消法快呀，1天就见到细胞贴壁，1周左右就可以传代，组织块最少7天才有细胞迁移出，传代最少要1月，我推荐酶消化法用的胶原酶2（浓度1mg/ml),消化4小时就可以了

brian111

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0 H6 X0 r3 K4 ^( `9 h; S4 ^这位兄台，不知道你说的机械法纯度不高是怎样一个标准？我没做过酶消化，只做过机械法。我们用的流式测纯度能到98左右，当然只是流式结果，其他的方面没有做。不知道酶消化能多高？还有有人说酶消化由于有化学物质，可能对细胞有损伤，你觉得有影响么？仅从细胞状态来说，这两种方法哪个更好些？

yanlu98

以前我同时做过贴壁法和酶消化法，贴壁法的周期太长了，当酶的已经传到第二代时，贴壁法还不能传代，虽然贴壁法原代处理时不需要多少成本，但是由于培养周期太长，期间要不停的换液，所以消耗的培养基也多，所以现在我一般都用酶的。