关于碱性磷酸酶染色的讨论

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偶氮偶联法（Kaplow法）
/ q9 S; n! E  f- m. ^7 q8 v原理
. `, ~! D7 w+ i$ Z1 M中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.2~9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠，并释放出磷酸与萘酚。再以重氮盐与萘酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。
5 \6 A6 b; j7 d7 ]' x+ c- n' b5 T结果7 K9 [6 |3 \/ M- c7 g8 b
坚牢蓝RR阳性为紫黑色颗粒，坚牢紫酱GBC阳性为棕红色沉淀。
/ E, [# V; P+ e7 S0 h! g  @实验方法5 Z( [# P- H/ U. m5 ^8 X
材料：
, Y) ^5 h- L7 [  I" t/ o8 Q% Z1. 10%甲醛甲醇固定液6 A6 a/ c0 ]* k9 a+ r+ I
    甲醛     10 ml
/ x' h( [/ W* U* w" E2 ~, O; k$ Z    甲醇     90 ml
; [$ e# E" T/ P# W1 ^    20C ~80C避光保存。$ h2 @. [% _3 a8 @
   2. 丙二醇缓冲液
# H( i( d  F9 W; d4 g3 f7 f# @1 c    (1) 贮备液(0.2 mol/L)
# j" p$ x9 v" S5 x5 }2 v    2-氨基-2甲基-1，3-丙二醇             10.5 g9 E; ]7 W- h; n
    蒸馏水                              加至500 mL
8 c5 o3 ?0 q( j; p- e- ~1 n    溶解后保存冰箱内。# p; W  a" C' r; V, E
    (2) 应用液(0.05 mol/L，pH 9.75)9 h8 ?$ w& O# D& v# A
    0.2 mol/L贮存液                      25 mL* @2 A! ^2 E, X$ v& ^# S
    0.1 mol/L盐酸                        5 mL& o$ B4 G# {8 M) Z% N6 Z. U6 m0 V
    蒸馏水                              加至100mL
* {: I( i1 r/ t' y4 n7 m! Y  3. 基质孵育液(pH9.5-9.6)–磷酸萘酚钠20 mg溶于0.05 mol/L丙二醇缓冲液20 mL，再加坚牢紫酱GBC(或重氮坚牢蓝)20 mg混合后用滤纸过滤，用前临时配制。$ }3 w7 |' J$ y
    方法：
/ q- }! r. B2 _7 j, g4 r  1．固定  新鲜干燥的涂片用10%甲醛固定注液固定30s，蒸馏水轻轻冲洗30～60s，待干。
3 h% V! X8 q" I( w% |0 c/ f0 Y2 J  2．显示  把涂片浸入基质孵育液中，在室温下温育10～15min(冬季放孵育箱温育)。蒸馏水冲洗2min。
( E+ z) A. d8 r9 {% V  B) I  3．复染  置苏木素复染液复染5～8min，蒸馏水冲洗1～2min，待干，镜检。" z% I  M2 P& [! T& H+ F
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