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w343989328

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金话筒优秀会员

楼主

发表于 2012-1-6 23:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请问有人熟悉TALEN技术吗？
想请教下这种技术利用Fok1酶切后连接的步骤？+ M/ M% U+ u, L j9 k: {
还有就是利用现在的技术能不能实现knock in?

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chutu

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优秀会员金话筒

沙发

发表于 2012-1-7 13:08 |只看该作者

一对TALEN导入细胞表达后，在特定序列处切断DNA链，产生双链断裂（DSB），这会激活细胞内的DNA修复系统，主要是在非同源末端连接（NHEJ）机制参与下进行断裂端的重新连接。但是NHEJ是一种极易引入错误的修复过程，会在连接处缺失或插入寡核苷酸，从而可能破坏基因的正常序列，引起靶基因的突变。所以可以利用TALEN技术进行很高效的定点基因突变，可以从中筛选出靶基因Knockout的细胞克隆。另外，DNA双链断裂也会增强同源重组修复过程。利用这一特性，与TALEN同时导入靶基因同源片段，可以增加同源重组的效率，也就可以提高Knockin的成功几率。