对于贴壁较牢的细胞传代时如何消化？

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有些细胞贴壁很牢，用胰酶短时间消不下来，消化时间长了细胞就死了。请教各位大虾怎么消化？

namulow

消化完成后，在加入培养基中和胰酶，这时用滴管吹打，会有很多气泡，这个问题咋解决呢？

xiaopingzeng318

当然是指加了胰酶或者胶原酶后

xiaopingzeng318

可放在37度培养箱中，有一部分细胞变圆后，可用手敲一敲瓶子，不可用力过猛，然后DMEM终止消化、吹打几次使细胞脱落，收集后再用盐水洗一洗，吹打、收集

何露

我们这里贴壁教劳的话，用PBS洗3遍，再用高浓度的胰酶，或者消化2次

xbs530515

如果细胞实在困难，可以依次考虑：
# u0 r2 C# I# q1.如前面战友所说的，先用胰酶将细胞表面润洗一次，才吸弃，重新加入胰酶进行消化。可考虑放入培养箱，在37度条件进行消化，每隔几分钟进行观察消化情况。% C4 g& ^7 n3 R; H
2.进行第一步操作，都还不能很好的消化细胞，考虑在胰酶中加入EDTA。) h8 Q7 i2 v. k$ y4 b0 d' Q8 S
3.如果这样还不行，可能要怀疑你的胰酶的活性了，重新找点胰酶来试试看。3 \8 R( X+ S9 z9 E) }, R
顺便问一下楼主，你究竟是养的什么细胞，有如此的顽固不化？
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荷荷

消化的时间长了对细胞有损伤的。不知楼主养的什么细胞，如果可以的话，可以试试加有EDTA-2Na的胰酶，在消化前用PBS洗两次。

LQAI2012

这种情况之前我在剪切力条件下培养细胞的时候也遇到过……5 t7 u/ z+ U- w+ S& |/ U( D$ y
PBS冲洗2次是很有必要的，洗去原培养基中残留的血清啊金属离子啊什么的会影响胰酶活性和EDTA作用东西
6 z, R. j0 |- P) |% b( ?9 ^  X然后，可以加大胰酶用量的，（之前我地面对照组用500微升，剪切力组加了1.5ml），可以敲打或轻摇培养瓶，帮助细胞脱落分散。然后，要实时在显微镜下观察细胞形态变化，及时终止反应！！免得消化过久细胞死掉……
) V5 R" x* `6 ~- _* Q, N$ I希望对你有帮助~

huangcong1988

三个方面：一是在用PBS洗细胞的时候多洗一次，二是加胰酶的量（多加一点），三是消化时间（加长一点），这样应该还是能消化完全

rain2402

如果胰酶不存在问题的话可以用低浓度或半浓度的胰酶消化15-20min。显微镜下观察消化效果，看效果可以再终止消化。