对于贴壁较牢的细胞传代时如何消化？

759512199

有些细胞贴壁很牢，用胰酶短时间消不下来，消化时间长了细胞就死了。请教各位大虾怎么消化？

zzc2211

PBS充分清洗，去除血清成分，0.05-0.1%胰酶加入后，先干点别的，等上15min后，再观察，终止，如MDCK。也可用胰酶原液，但要注意观察，消化下来后迅速终止，作用时间长细胞就完了。

759512199

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4 J0 \1 s& Z. ^3 e9 ^5 h0 P1 R
, C1 r$ ]+ t; A" ?8 i胰酶试过了，搞不定啊，要不消不下来，消下来就死啊！

aulenuyah

要不试试胶原酶？这个不怕时间久
+ Z; E. \; p" x" q

rongrong

可以不用PBS洗用胰酶润洗下，吸掉，然后再加适量的胰酶（0.5-1ml）37度消化，应该 没问题，我们实验室就是这样搞定的；还有一种方法就是配置一种胰酶，提高ETDA-Na2的量，这个的话就用pbs洗然后再消化，希望对你有帮助

新疆八钢

回复 759512199 的帖子
& a. m6 j  c4 X# Y- _" K3 J* t
. b( l2 F1 w7 @同意楼上意见，直接用半量胰酶预洗下，吸掉，然后再加适量的胰酶（0.5-1ml）37度消化，应该 没问题

houbara

用胰酶处理后，再用cell scraper.

细胞-77

我也遇到过这种情况，胰酶消化时，细胞不变圆，但可以从培养皿表面脱离。不知道是什么原因。

sirius_zou

1.胰酶37度消化，隔一段时间拿出来晃动一下并镜检! b# }, C' X9 A7 l, Q5 h" ]8 T
2.细胞变圆后用FBS终止消化4 A+ d& y( K, r( R
3.用细胞刮刀轻轻将细胞刮下并转移至离心管中
0 y; P1 s5 j7 |! n4.培养皿/瓶加少许PBS，镜检观察有无细胞，再用刮刀刮下。2 \" B2 g. H1 o" L) C

/ U* _3 f; |) y3 C2 C$ Y看LZ是什么细胞了，我以前养羊膜上皮细胞，就是这种方法传代的，只用胰酶消化是很难传代的。

zhaogy604

我的经验是如果用低浓度的胰酶消化，15分钟以内是可以接受的，对细胞影响不大，但是不清楚LZ培养的细胞类型