关于FISH

hughliang

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: R& a; [0 z% A, K* b严格按这个protocol做，做不出来找我。

hughliang

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2 h) E) _3 ^& i: ?$ D: g9 o
' t* T" ^* v6 ~: }6 V这要看您的实验目的。, F! R' O/ M4 G8 E6 G, m* c) ?7 v

0 |' |' A1 N; B我这个方案是指标记BAC或PAC克隆检测染色体畸变。由于靶点是单拷贝序列，只能通过缺口平移或随机引物法标记BAC或PAC克隆全长作为探针，否则信号太弱，无法检测。% t4 e6 {5 c& P; i, Q& N+ b

hughliang

回复 ambassador 的帖子! x, U1 b% z& z' p, N7 M

: d: v) h3 o2 ~得看您靶点的长度和拷贝数。: N6 e9 B' h) [3 i1 z. J5 f8 E/ j
0 {) `" |9 G; K6 Y* z: D
如果靶点是单拷贝基因，普通的寡核苷酸探针较短，即便标记探针全长也难以显示；所以得全长标记长达100kb左右的BAC或PAC克隆作探针。
* l, w2 a  m7 G" V( I) g6 U1 O) d# z  v; g
如果靶点是多拷贝重复序列，例如染色体着丝粒区域的微卫星重复序列（重复成百上千次），常用的方法是将该重复序列（几百bp）连入质粒，标记后作探针。
6 Z' C* Q0 E& w9 b$ \, k% `1 n  p1 R7 C! ~: U
所以，对于高度重复的序列，可以尝试寡核苷酸探针，但仅头端标记恐怕也难检测到。