【求助】iPS心肌诱导分化问题

ligangtiancai

RT，iPS在诱导EB过程中应该是悬浮生长 ，而我在诱导EB中iPS却是贴壁生长，问了下老师，认为可能是细胞状态的问题。不知有没有有经验的同学给点帮助，主要问题是：1.iPS诱导EB过程中细胞状态是否影响EB的形成；2.诱导EB的培养皿是否有要求（我自己用的是普通的细菌培养皿），先行谢过啦！

xiaoyurly

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ES的状态对于诱导EB的影响还是挺大的，多用养细菌的玻璃平皿来形成EB，时间不能过长，一般悬浮24h即可形成团/球状，时间太长（>48h）会出现贴壁，可能是重力因素。

xiaoyurly

回复 xiaoyurly 的帖子2 ~1 {& z( W6 V9 d

. ~& C' _( k6 ]# [% ~; X# t我们培养的是ES，非iPS，但是我觉得应该差别不是很大

ligangtiancai

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$ Z9 a8 T" x9 J
9 M) X3 ?- F, v5 ?3 @+ K$ w% H. l7 y请问你们用的ES是人的还是鼠的，也做EB或者心肌细胞的定向分化么？
# |1 m2 L- _9 c. B0 @/ {; i

xiaoyurly

回复 ligangtiancai 的帖子  D7 b4 K. F& x0 [/ O8 C
1 I: H  [# [/ _- W9 _1 G
我们养的是小鼠ES，正在做心肌分化方面的实验

nirvanapho

回复 ligangtiancai 的帖子, f% a+ d; w5 Y

+ D* Y* Y; v" Q, P9 N% Y0 C细胞状态挺重要的,另外就是EB悬浮时候起始的细胞密度也很重要

song58

Lancet：世界首次利用干细胞治疗再生出健康心肌5 h: v) `* q( W* x7 G6 m
http://www.bioon.com/biology/cell/517244.shtml

ligangtiancai

回复 xiaoyurly 的帖子# E9 B* d* t. e. U

1 C4 t  T' r: K, w! j) Y' V+ N您能给我一个mES作EB的protocol么 谢谢！

ligangtiancai

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) S& ^% I0 i: ]- H
6 R. X4 Y" M+ ^& w5 H能具体解释一下么。。是不是说细胞状态好的话悬浮的可能性大，或者密度合适的话比较好悬浮？

nirvanapho

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/ O# O, N. c3 S6 P9 [( W0 T' o: X/ ?) A/ T$ ?8 ]5 j
如果是96孔板的话，可以采用这样的其实密度：15,000 - 40,000每孔；如果ES细胞状态好，板子也没有质量问题的话，贴壁不会成为一个困扰。* S  ?) S! e9 L# A2 |6 J

; r. }8 E7 L# u& H我的建议是采用2i来养ES，这样ES的状态会好很多，只有一个好的起始细胞，才能保证后续实验的有效性；
! g$ ]1 h0 v: Y另一方面，如果有可能，可以使用corning的不贴壁板子。