【求助】iPS心肌诱导分化问题

ligangtiancai

RT，iPS在诱导EB过程中应该是悬浮生长 ，而我在诱导EB中iPS却是贴壁生长，问了下老师，认为可能是细胞状态的问题。不知有没有有经验的同学给点帮助，主要问题是：1.iPS诱导EB过程中细胞状态是否影响EB的形成；2.诱导EB的培养皿是否有要求（我自己用的是普通的细菌培养皿），先行谢过啦！

xiaoyurly

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  a$ i6 F" O( g% H! @7 x/ T" `+ X; o, |: h8 i. S0 t. v
ES的状态对于诱导EB的影响还是挺大的，多用养细菌的玻璃平皿来形成EB，时间不能过长，一般悬浮24h即可形成团/球状，时间太长（>48h）会出现贴壁，可能是重力因素。

xiaoyurly

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  A7 {# }" C4 g
# d: P( o2 m7 r9 E8 u3 w6 z我们培养的是ES，非iPS，但是我觉得应该差别不是很大

ligangtiancai

回复 xiaoyurly 的帖子* }9 k6 w6 D9 V2 a/ }( ~
1 r. Q8 t' m. j0 B
请问你们用的ES是人的还是鼠的，也做EB或者心肌细胞的定向分化么？: b; o' i* O% P$ V

xiaoyurly

回复 ligangtiancai 的帖子) F2 s# m6 Q: }0 {
( ]3 o( l( r% a* T$ ^' o* @
我们养的是小鼠ES，正在做心肌分化方面的实验

nirvanapho

回复 ligangtiancai 的帖子: A0 J2 q" U6 b' Q& S% ^) O/ P
+ m  m% }! a8 S6 c8 J  }- m& r
细胞状态挺重要的,另外就是EB悬浮时候起始的细胞密度也很重要

song58

Lancet：世界首次利用干细胞治疗再生出健康心肌4 ]; g* H- [4 w& \. ]6 N
http://www.bioon.com/biology/cell/517244.shtml

ligangtiancai

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# m7 X. n5 G5 g5 w7 f6 {. p7 v; X- P. ]
& b) G- H4 Z% T" \您能给我一个mES作EB的protocol么 谢谢！

ligangtiancai

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2 e6 u2 p2 V, u! l; |1 t% D- ]5 M6 U5 g5 O0 G
能具体解释一下么。。是不是说细胞状态好的话悬浮的可能性大，或者密度合适的话比较好悬浮？

nirvanapho

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0 V8 ^) C: }% ~5 a5 g1 W7 g8 [) i9 r: t: h$ u" r- J
如果是96孔板的话，可以采用这样的其实密度：15,000 - 40,000每孔；如果ES细胞状态好，板子也没有质量问题的话，贴壁不会成为一个困扰。. D9 R/ y$ J: l  i% g
+ @, U+ S7 g3 s0 o
我的建议是采用2i来养ES，这样ES的状态会好很多，只有一个好的起始细胞，才能保证后续实验的有效性；: ~! e3 ?* k/ V4 t- P
另一方面，如果有可能，可以使用corning的不贴壁板子。