慢病毒包装质粒 能否共用？

xiongjiedeng

  你用什么细胞制备慢病毒，这其中的原因就比较多了；比如你细胞的状态和密度，包装质粒的用量，还有目的质粒的用量等；下面是我经常用的磷酸钙转染制备慢病毒的方法，包装质粒也是delta 8.91、Pvsvg，从来就没失败过，参考一下
* @! O- L' n; M! _磷酸钙转染制备慢病毒, ?- _% z5 o: x' l. V% \
1、 试剂配制
( @2 I( O3 q  c1 o% M1 a& b1.1  2×HBS（500ml体系）:; i( q1 u8 ?" i$ ^8 y
样品        浓度（mM／L）        质量(g); h- T4 j# V. I  G6 d1 W
NaCl        280mM        8.18g. Z  s. D! G1 e; ]& Z) Y2 Q0 Y
KCl        10mM        0.375g5 J3 B$ e0 F: a
Na2HPO4          1.5mM        0.1g
" ~# o& K: X5 G: X/ Y* nglucose        12mM        1.19g
* }( j4 g# v4 H, C* Y7 wHEPES          50mM        5.95g8 u1 A- \# D+ I; J  G
        配好pH在6左右，用NaOH调到7.4，加ddH2O 至 500ml 灭菌$ r/ w5 ?3 j1 W) t+ _& P
        1.2  2M CaCl2    二水氯化钙 58.8g  加ddH2O 至200ml
4 t' T/ m( K' \- _3 |9 |1 _        2、转染步骤
" P6 n: o/ M/ ^+ a        （1）、10cm盘293T细胞，50-70%铺满率转染0 Q8 V/ U! J' y/ W, {8 d
（2）  将下列3种组分混匀
- a3 r+ W0 a% N9 X% q试剂        体质或质量
' B& Z# D3 {6 m$ R6 `5 l灭菌超纯水H2O        600ul
' D& n: t" a! ZPlasmid（质粒）
6 T/ O' y8 T" W; D) p% Y4 L（共270ul）        cDNA（目的质粒）          12ug+ W6 d, ]7 L% ^  F- h
        delta 8.91（包装）        9ug9 v! v0 L# A9 \7 C/ c/ D
        Pvsvg（保证）        6ug/ t* ~9 a  m  A( T4 V: A
2M CaCl2        132ul
( G% H/ J4 L4 k: v        （3） 加1000ul的2×HBS ，再吹打50次，充分混匀，立即加入培养皿摇匀，6-8小时换新鲜培养基即可
' m1 S" ?1 C/ E% X+ x9 V% M2 N0 M（4） 48小时和96小时分别收集上清即可

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; ]9 K8 R3 @1 [' M/ O我们实验室用量比较大，包装质粒都是自己大提出来的，我在长沙，你呢？