关于提取RNA之前要注意的细节

holywater

为了威望只好吧自己以前的经验细节分享。& g/ q, j# A- Y! G
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RNA一旦处死机体就会降解，所以要注意的是要快。如果还没想好要做RNA还是western，
% S4 }& t# d9 g$ L  q/ k  F( m那么最通用的方法如下2 ]8 m$ T9 v5 p+ @( f# A. l: P  s) E
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用进口管子，写好记号，插入干冰/液氮里面遇冷。组织块取出后立即放入里面，只要轻轻一碰，组织就会粘到管壁，这样组织迅速降温到-80度
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最重要的注意事项：组织块千万不能太大，每一个样品不能大于1立方毫米！不然trizol处理不到内部，得不到正确结果。过大的请迅速切割
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如果就是直接做RNA，那么同样的，也可不经过冰冻，直接放入trizol，也是同样大小要求。
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  |7 K- S: ]  J, n  M! j$ u- U3 p也有人想提取RNA后再分离trizol里面的蛋白去western--根据我的经验，是可行的，但是最大的遗憾是无法定量，也就是无法调平。因为里面有很高的SDS。但是做定性试验应该还是可以的5 @1 O7 Z. t% k
定量就比较麻烦了。

lcxlorna

谢谢，有用！

yaqingqing

不错，经验之谈啊！！

573639471

提取RNA后再分离trizol里面的蛋白去western，怎么做啊 能说详细一点吗

holywater

回复 573639471 的帖子
" f% _- B- S2 U; j5 A
3 N5 c+ c' i, \3 S! Z5 linvitrogen 的trizol说明书上有很详细的说明
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$ q6 W  ]" ~! |7 ]% w6 Z! H6 L, _& L7 O另外，回收的有一定的损失率。) ~8 U  L$ V) }4 m; Q7 I
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最麻烦的还是不能定量，只能用来做定性试验* J1 F" b! O" A
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mansnoopy

回复 holywater 的帖子* M' g3 Z: q! p# Q; g# z
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组织样品一般50mg-100mg 加1mltrizol 即可  组织块稍微多一点也没有关系。记住匀浆不是超声