关于提取RNA之前要注意的细节

holywater

为了威望只好吧自己以前的经验细节分享。
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; P# k# l( K  `RNA一旦处死机体就会降解，所以要注意的是要快。如果还没想好要做RNA还是western，
# }# y- Q+ A3 O( e; k& x# r" j9 P那么最通用的方法如下
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4 o9 F! J- @& S8 q7 g3 u用进口管子，写好记号，插入干冰/液氮里面遇冷。组织块取出后立即放入里面，只要轻轻一碰，组织就会粘到管壁，这样组织迅速降温到-80度
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! d4 {2 J' d1 k' r- x: S最重要的注意事项：组织块千万不能太大，每一个样品不能大于1立方毫米！不然trizol处理不到内部，得不到正确结果。过大的请迅速切割
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8 Q. _1 r5 o; }5 z, |! I如果就是直接做RNA，那么同样的，也可不经过冰冻，直接放入trizol，也是同样大小要求。
1 E& r/ D( x+ x6 g1 r7 C: S$ L! a2 i3 `
也有人想提取RNA后再分离trizol里面的蛋白去western--根据我的经验，是可行的，但是最大的遗憾是无法定量，也就是无法调平。因为里面有很高的SDS。但是做定性试验应该还是可以的
  b& `% t* `+ H* D  F定量就比较麻烦了。

lcxlorna

谢谢，有用！

yaqingqing

不错，经验之谈啊！！

573639471

提取RNA后再分离trizol里面的蛋白去western，怎么做啊 能说详细一点吗

holywater

回复 573639471 的帖子
& r# H$ O9 G4 q4 \0 K1 W
- [* k4 ]% F5 V' H. _8 i$ ]invitrogen 的trizol说明书上有很详细的说明
0 Z& g2 Y% J( V5 ?  G7 D% b5 B; P- U2 ?; j
另外，回收的有一定的损失率。& K. ~; p  x9 c, u5 p; s
; b' \* h$ D3 k" `7 t6 O" ^
最麻烦的还是不能定量，只能用来做定性试验
  h; e" w6 T* w+ [- q) U4 X7 D  o
7 z$ w5 u4 f  V( x) P9 m2 i

mansnoopy

回复 holywater 的帖子0 Y6 J4 v: g, L, Y! _( H- L
5 q8 ~! c" k' ^, _6 E" C) b3 J
组织样品一般50mg-100mg 加1mltrizol 即可  组织块稍微多一点也没有关系。记住匀浆不是超声