pLP1、pLP2、pLP/VSVG包装慢病毒

hetven

这比值似乎是存在一定争议。有人建议1:1:1:1，但VSVG确实会对细胞状态影响较大。另外一个比较流行的建议是plp1 10.5, plp27, vsvg 10.5，表达载体9.5.1 j7 A5 u/ ^/ C
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在plos one在篇文章的比例是1.3表达质粒，0.9 lp1，0.3 lp2及0.5 vsvg。这个vsvg比例似乎合适，但显然不符合表达质粒:包装质粒为1:3的规则。另外，这篇文章加Cacl2转染，不知道为什么。

hetven

ghfvcat 发表于 2012-3-28 10:20
4 O. I& e. O% |# J5 N3 B: H哈哈，实在不确定比例的话，从英骏买个现成的混合物，做一个实时定量看看质粒的比例

* M% U7 l# C7 Y; `3 A+ ^" }3 S确实要知道也不用实时定量这么麻烦，太敏感了还容易放大误差。
" [8 ~8 X$ I  k. }0 M4 p7 F/ C/ _- E+ S6 Q# M
如果有现成的混合物，买回来，跑块胶，大概就知道了。

hetven

sj03572001 发表于 2012-3-31 11:32
1 B; T2 O0 _9 a$ GVSVG作为膜蛋白，表达量过高对细胞毒性，回造成细胞死亡，如果按1:1:1的比例应该不是最佳的，nature protoc ...

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这篇文章的质粒用量好大啊。

hetven

ghfvcat 发表于 2012-3-28 10:20 ( B8 b9 o. ]' Y3 K
哈哈，实在不确定比例的话，从英骏买个现成的混合物，做一个实时定量看看质粒的比例

- h3 c. V+ y2 k  S' j要知道也不用实时定量的，太敏感又缺乏内参，误差的放大无可估计的。& Y7 w" K$ A* q* s
4 D# @( z* b$ v! q( [; G' k( }1 d" h
直接跑个胶就大概知道了，关键是没有这个混合物。