pLP1、pLP2、pLP/VSVG包装慢病毒

hetven

这比值似乎是存在一定争议。有人建议1:1:1:1，但VSVG确实会对细胞状态影响较大。另外一个比较流行的建议是plp1 10.5, plp27, vsvg 10.5，表达载体9.5.1 E7 j5 l' D! f  E

. i2 p/ J: G) Z+ p: {1 s- b在plos one在篇文章的比例是1.3表达质粒，0.9 lp1，0.3 lp2及0.5 vsvg。这个vsvg比例似乎合适，但显然不符合表达质粒:包装质粒为1:3的规则。另外，这篇文章加Cacl2转染，不知道为什么。

hetven

ghfvcat 发表于 2012-3-28 10:20 , A& z9 t. t( Y: a
哈哈，实在不确定比例的话，从英骏买个现成的混合物，做一个实时定量看看质粒的比例

' F, S7 x7 o$ ]+ v7 J% s! j确实要知道也不用实时定量这么麻烦，太敏感了还容易放大误差。
0 Q! \! o2 L. r5 J  c) t8 K, H6 D: z: L$ K  E- g
如果有现成的混合物，买回来，跑块胶，大概就知道了。

hetven

sj03572001 发表于 2012-3-31 11:32 & `$ h) g* i8 I. g3 [5 T
VSVG作为膜蛋白，表达量过高对细胞毒性，回造成细胞死亡，如果按1:1:1的比例应该不是最佳的，nature protoc ...

) G* M* S, v; q' j" z/ P这篇文章的质粒用量好大啊。

hetven

ghfvcat 发表于 2012-3-28 10:20
7 `( M' F2 z" r" E6 s% T9 \) n0 z哈哈，实在不确定比例的话，从英骏买个现成的混合物，做一个实时定量看看质粒的比例

& P" Y. P5 ^: l- V/ R4 M0 D
要知道也不用实时定量的，太敏感又缺乏内参，误差的放大无可估计的。
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直接跑个胶就大概知道了，关键是没有这个混合物。