关于干细胞成软骨的问题

wuyannini

我看到有的文献报道关于成软骨培养基的配制只这样的：
: T3 M( L7 @9 _) |成软骨诱导：
4 v, ?5 r+ U6 H: M6 h- n: P( XDMEM-HG 10FBS
2 U% `4 W! m- M: _! ]" E+ x6 e脯氨酸（proline）                      4mM
, o4 {2 \- _" q9 D3 W抗坏血酸维生素C （ascorbic acid）       50ug/ml      
3 d0 @6 R& [3 W% PITS-Premix                                                 1% 5 `( C2 q9 E/ V' f: I- o4 @
丙酮酸钠（sodium pyruvate）           1 mM
9 W* U5 A( c, g; ^! s地塞米松（dexamethasone）            0.1um* X9 F3 A; F$ j3 m( h+ e+ ~) ^
TGFβ3                                                        10 ng/mL
, g# L( j4 N0 Q- W1 h" ]4 w请问有经验的大侠，脯氨酸是L还是D，还是都可以？ITS-Premix是什么？这些试剂哪个厂家的比较好？谢谢啦; e+ g9 m3 U) G) p
另外，染色液的配制及染色方法也麻烦赐教。  
; n/ `! N& l' `4 x不要随便粘贴过来啊，要已经成功的经验啊。非常感谢啦！

wuyannini

非常感谢！

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。  h- e& h. C# p- h; ^0 P6 P! v
再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。1 N% l; A7 |: A5 ]' D3 W
软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。' \! z; ~) r  C
再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。
9 ~$ R  ]: f/ m1 s2 F! W# R软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。