关于干细胞成软骨的问题

wuyannini

我看到有的文献报道关于成软骨培养基的配制只这样的：
$ L4 W0 m4 e0 y" d' q# G; B成软骨诱导：6 p% y  L& B) y$ \
DMEM-HG 10FBS8 T( H1 ?; e8 Y! K% I" _  G
脯氨酸（proline）                      4mM7 ?6 T  z  J& @- N. T3 {, n0 ^) P% m
抗坏血酸维生素C （ascorbic acid）       50ug/ml      
& a) M/ h& T. X  y- XITS-Premix                                                 1% 4 H! S. `# v- j
丙酮酸钠（sodium pyruvate）           1 mM
) a3 g, {5 W) Z+ w3 Y* b8 s地塞米松（dexamethasone）            0.1um+ P! V$ K# I& D$ n5 V0 q+ h
TGFβ3                                                        10 ng/mL, O3 }3 U0 [0 l6 A
请问有经验的大侠，脯氨酸是L还是D，还是都可以？ITS-Premix是什么？这些试剂哪个厂家的比较好？谢谢啦0 G9 f, i" G4 u7 s
另外，染色液的配制及染色方法也麻烦赐教。  
/ I' p. L$ V) }9 _不要随便粘贴过来啊，要已经成功的经验啊。非常感谢啦！

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。/ o2 K; B! Q/ V
再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。
- ~; ^1 T, F3 U% [6 `  `8 ?3 B软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。2 r# V' ]% f+ u
再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。4 u8 f: ]7 b  N3 i* T2 j: |* N
软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。

wuyannini

非常感谢！