关于干细胞成软骨的问题

wuyannini

我看到有的文献报道关于成软骨培养基的配制只这样的：0 S0 ]5 t# v' J* K7 j
成软骨诱导：
+ B9 H1 T9 r+ ^  ^0 x* U/ yDMEM-HG 10FBS
, u: L# y" N% b/ Q# x% A6 C/ K脯氨酸（proline）                      4mM! ^' Q2 \# i$ w  D* W/ S
抗坏血酸维生素C （ascorbic acid）       50ug/ml      
3 E% t8 c# J; h4 ~ITS-Premix                                                 1%
. ]& u2 X: a; V丙酮酸钠（sodium pyruvate）           1 mM; M7 I* ?4 R. q! h
地塞米松（dexamethasone）            0.1um
8 \, l0 E* M6 Z& s6 gTGFβ3                                                        10 ng/mL
/ ^: }: o# o3 c请问有经验的大侠，脯氨酸是L还是D，还是都可以？ITS-Premix是什么？这些试剂哪个厂家的比较好？谢谢啦
& i4 T9 m8 d) n+ @另外，染色液的配制及染色方法也麻烦赐教。  
0 m$ ?6 I& S, p: M, X. H  O不要随便粘贴过来啊，要已经成功的经验啊。非常感谢啦！

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。
6 H8 f! v: Y) M5 e1 o再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。4 Q4 q, V, I' U
软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。

wangzhiqi86

看来你是第一次做软骨诱导了，ITS是无血清添加剂，分别是胰岛素（insulin）、转铁蛋白（transferrin）和亚硒酸（selenious acid），+premix里面还有BSA和亚油酸，你可以看看BD的，proline是L-型。8 K  H9 Q! g% r8 @3 V' m
再有，软骨诱导时不要加血清的，不知道你是从哪里看到的文献。; b* M, V0 Z3 j+ G* h; v5 a0 ^7 C
软骨诱导有很多种，一般是番红O、甲苯胺蓝和阿利新蓝染色，这个鉴定ECM的aggrecan，具体步骤你可以上网查。还可以用免疫荧光和免疫组化来染色鉴定II型胶原。

wuyannini

非常感谢！