关于细胞室内的操作的注意事项

luoziwei

我本人养细胞养了已经有5年经历了，最近1年有幸（还是被麻烦呀？）管理实验室的细胞室。很多人养了3年细胞，愣是没养好细胞，结果混混沌沌的就硕士毕业了。总有人问我怎么才能养好细胞。其实细胞培养没什么技巧，就是要心静，不能着急，养成良好的无菌习惯和实验习惯是必须的，做完实验要清理自己制造的垃圾。我想每个人都不想自己在准备做细胞实验之前，超净台就已经是凌乱不堪的吧？在分享我的经验之前，我先跟大家讲一个小小的背景，我在真正动手养细胞之前，光用眼睛看师姐师兄养细胞就看了半年！就是在细胞室准备棉球等杂事之类的。没错，很枯燥，很无聊，但这是一个类似思想训练的过程。经过这个过程，我明白细胞的生长真不容易，得潜心下来照顾它们吃好喝好睡好，它们可是宝啊！& |. g7 C) K1 w' K
下面我把我们在细胞室的操作要求分享一下。8 H" S0 R# ~/ G3 `

% X& |6 A# ?/ E+ f; K; U& W1.每天应该对细胞实验室至少进行每天3次，每次半小时的紫外照射灭菌。紫外辐射对人体有害，灭菌时，人员不能进入细胞实验室。
/ Q! R& n3 [! e" m% j2.进入细胞实验室操作的人员，应该身着无菌服，长发者戴帽子，更换消毒过的拖鞋，操作有毒试剂要带好手套。外来带入的物品，都要经过紫外照射或者酒精擦拭的表面灭菌（这个是必须的！）。 + ~; ?0 \$ d9 i7 T" i
3.裸手进行细胞操作，则要在操作之前用消毒液洗手，并在将手伸进超净台前用酒精擦拭全部手部皮肤。带橡胶手套进行细胞操作，在将手伸进超净台前也要用酒精擦拭手套的整个外表面。NOTE:禁止佩戴手饰进入！ ) U6 f. u& F5 T
4.试剂要按储存要求保存，在超净台内打开过一次的试剂，储存前要用封口膜封住瓶口，并最好在封口膜上表明打开日期。  
  j% q7 D- H, s: t  x* E& B2 \/ o0 ~5.超净台灭菌以后，任何拿进超净台的物品都要用酒精擦拭物体的全部表面，然后在酒精未干之前放进超净台。要使用到的细胞培养耗材可以在超净台灭菌前放入其中，跟超净台一起灭菌。而细胞培养要使用到的试剂则不可以放入超净台接受紫外照射。 ) ?8 P: u; ]- [! C! f, I3 B
6.细胞实验要使用到的直接接触细胞的试剂，一般要在37度水浴锅中预热半小时，使其温度接近37度。消化的胰酶最好先预热。
4 d& L6 n0 j  f, S9 R, n3 I' U0 j7.细胞离开培养箱被进行操作的过程不宜过长，否则由于外界温度和二氧化碳浓度的不适，会导致细胞状态不好甚至死亡。   }: R. Q# {; H3 e5 ^' I
8.细胞培养用的器皿，包括培养瓶、培养皿等等，要对着酒精灯的火焰打开开口，操作过程开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。细胞培养使用的试剂，在酒精擦拭试剂储存器皿后带入超净台。打开瓶盖之前要再用酒精棉花擦拭瓶口，然后对准酒精灯火焰打开开口。操作过程整个开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。
# Z' H' E) P0 y5 @9 U9.操作过程最重要的原则是保持细胞和试剂无菌，并且避免细胞和试剂之间、试剂和试剂之间的交叉污染。比如已经将移液管伸入细胞瓶里吹打细胞，那么要再吸取新的培养液加到培养瓶中则不能再使用该移液管，一定要更换新移液管再去吸取新的培养液。尽量减少细胞和培养液暴露的时间。
8 t; T6 f2 X5 T10.细胞孵箱不能反复打开，而且应尽量快开快关，否则温度、湿度、CO2浓度都达不到要求，细胞能长好才怪？尤其注意的是湿度，一定要大于80%以上！小贴士：经常给孵箱加水。

holywater

楼上说的很中肯。不过我实在是好奇哪个学校能细胞都养不好然后浑浑噩噩毕业

huangcong1988

而细胞培养要使用到的试剂则不可以放入超净台接受紫外照射这是为什么呢？培养基就不能紫外消毒么？

xiangchou812

实践很重要！

大少爷

紫外线能使蛋白质类物质结构发生变异，使之失活，所以酶失活(同样包括RNA酶)，但是就培养液来说，其中包括的糖类，脂质，无机盐的结构不会改变，只有其中的蛋白质失活。

yuhaoze

回复 holywater 的帖子) K# J4 S5 Q5 s9 p

, T0 O& Z7 R" [真刻薄~~~你是饱汉子不知饿汉子饥，我们学校就这样，随便就毕业了，当然名字就不告诉你了。

holywater

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' d  `; D' o* p* \2 Y6 I1 ^# f. h
5 y7 q* \% X% ^) W7 x3 T大哥，紫外线透不过玻璃和塑料的$ ?* y  K- [* y$ X, V
4 W, [5 S) A( [9 }, W
只能表面消毒，一张纸都能挡住

holywater

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* d) ?$ c8 y- E* n0 S- m: X6 }" S- _5 {2 {& o3 G
我们学校不发SCI不让毕业。

shashou_com

在操作台里面，我们早不用酒精灯了。超净台主要靠通风保持无菌环境，酒精灯起作用不大，而且影响气流。
+ w+ y- u7 U! l而且外来物品入内并不一定需要紫外照射，比如说拿了一本档案紫外照射是没有效果的，+ k; T8 \( O5 [3 N, _1 a; M. i
紫外的穿透力有限，更本起不到灭菌作用；而且也不能有酒精擦啊。只要不入超净台即可。' t3 L3 k; o2 E/ O$ b5 @8 H
细胞所需试剂要预热到37摄氏度，我觉得这个是没有道理的。常温即可。  i9 E/ n0 ~" U* n" G2 ^
整体上还是挺不错的，顶一下。

Tim

回复 yuhaoze 的帖子1 }4 r( G( ]# q

5 B1 E/ L  l: }* j' @, O求学校名字！