关于细胞室内的操作的注意事项

luoziwei

我本人养细胞养了已经有5年经历了，最近1年有幸（还是被麻烦呀？）管理实验室的细胞室。很多人养了3年细胞，愣是没养好细胞，结果混混沌沌的就硕士毕业了。总有人问我怎么才能养好细胞。其实细胞培养没什么技巧，就是要心静，不能着急，养成良好的无菌习惯和实验习惯是必须的，做完实验要清理自己制造的垃圾。我想每个人都不想自己在准备做细胞实验之前，超净台就已经是凌乱不堪的吧？在分享我的经验之前，我先跟大家讲一个小小的背景，我在真正动手养细胞之前，光用眼睛看师姐师兄养细胞就看了半年！就是在细胞室准备棉球等杂事之类的。没错，很枯燥，很无聊，但这是一个类似思想训练的过程。经过这个过程，我明白细胞的生长真不容易，得潜心下来照顾它们吃好喝好睡好，它们可是宝啊！
- _; w: e9 l. F0 |& {/ h下面我把我们在细胞室的操作要求分享一下。
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1.每天应该对细胞实验室至少进行每天3次，每次半小时的紫外照射灭菌。紫外辐射对人体有害，灭菌时，人员不能进入细胞实验室。 + M! z, G; A7 \  i: R" l1 g' u
2.进入细胞实验室操作的人员，应该身着无菌服，长发者戴帽子，更换消毒过的拖鞋，操作有毒试剂要带好手套。外来带入的物品，都要经过紫外照射或者酒精擦拭的表面灭菌（这个是必须的！）。
( H' l9 p# s' h# l3 K4 M' y3.裸手进行细胞操作，则要在操作之前用消毒液洗手，并在将手伸进超净台前用酒精擦拭全部手部皮肤。带橡胶手套进行细胞操作，在将手伸进超净台前也要用酒精擦拭手套的整个外表面。NOTE:禁止佩戴手饰进入！ ; G+ ?* W+ B5 P9 ?: H. _
4.试剂要按储存要求保存，在超净台内打开过一次的试剂，储存前要用封口膜封住瓶口，并最好在封口膜上表明打开日期。  6 u8 y+ x% l3 n: x6 K
5.超净台灭菌以后，任何拿进超净台的物品都要用酒精擦拭物体的全部表面，然后在酒精未干之前放进超净台。要使用到的细胞培养耗材可以在超净台灭菌前放入其中，跟超净台一起灭菌。而细胞培养要使用到的试剂则不可以放入超净台接受紫外照射。
( Q0 W, F* S6 ~4 y' K8 U$ @+ h. j" A- _6.细胞实验要使用到的直接接触细胞的试剂，一般要在37度水浴锅中预热半小时，使其温度接近37度。消化的胰酶最好先预热。
( P9 c3 N/ }* A3 y6 l0 c: E4 b2 K7.细胞离开培养箱被进行操作的过程不宜过长，否则由于外界温度和二氧化碳浓度的不适，会导致细胞状态不好甚至死亡。
! X, c' K. M# u) {- v3 x8.细胞培养用的器皿，包括培养瓶、培养皿等等，要对着酒精灯的火焰打开开口，操作过程开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。细胞培养使用的试剂，在酒精擦拭试剂储存器皿后带入超净台。打开瓶盖之前要再用酒精棉花擦拭瓶口，然后对准酒精灯火焰打开开口。操作过程整个开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。
" i2 L- m& T  w* O9.操作过程最重要的原则是保持细胞和试剂无菌，并且避免细胞和试剂之间、试剂和试剂之间的交叉污染。比如已经将移液管伸入细胞瓶里吹打细胞，那么要再吸取新的培养液加到培养瓶中则不能再使用该移液管，一定要更换新移液管再去吸取新的培养液。尽量减少细胞和培养液暴露的时间。
/ M* T$ I* w! U! M4 l10.细胞孵箱不能反复打开，而且应尽量快开快关，否则温度、湿度、CO2浓度都达不到要求，细胞能长好才怪？尤其注意的是湿度，一定要大于80%以上！小贴士：经常给孵箱加水。

wewiwa66

难做到的应该是在满足无菌原则的前提下尽快操作，动作慢的新手得反复练习才行。

yangzeqian

回复 huangcong1988 的帖子
6 ^' ?6 }( q9 {6 K, U: E1 @0 p
" O# M' M7 x: L. V- M; g( r紫外线很厉害的，会直接杀掉很多营养物质，一般现在的紫外线会带有臭氧，进入培养基其他之类的试剂，会影响原有的功能。不过，盐水，封好了，没什么事

summerpie

进来学习的

lccsiais

紫外灯有两种，一种是260nm的，这种灯是直接照射灭菌，距离灯光越近越有效，但被遮挡的就难以灭菌了。另一种是180纳米左右的，这个主要是产生臭氧灭菌。
5 V6 H% }1 y, c细胞培养基不能直接照紫外，你可以拿黑色袋子把它套起来，避免紫外直射，用臭氧灭菌。PBS可以照紫外。0 G# y# |$ L0 q
高级的细胞间有自动化装置，人在时抽风关紫外排臭氧，人一离开就自动开紫外并且点亮门口的警示灯，要使用这种房间必须做好预约和准备，非常规范的去操作。

iamzhangxiaoyu

操作虽然重要但是养细胞不能忽略了一个重重之重的一点就是一定要买到真的进口血清，假血清害死人。。。。

chxq

时间出真知

穿裙子的猫

6.细胞实验要使用到的直接接触细胞的试剂，一般要在37度水浴锅中预热半小时，使其温度接近37度。
: t' m4 S2 B. w0 a4 h) \9 |2 g我们的是直接从4度冰箱拿出来，至室温就可以用了。没有达37度，感觉还好，如果试剂太冷，细胞会皱缩的！

月_幻影

回复 569981454 的帖子; f0 d/ u( G- ^# X0 \
7 }& q- l* V" l. U
怎么说呢，其实也没什么的，毕竟是超净台上的紫外，它的主要消毒区域是超净台，你虽然呆在实验室里但是不用坐到台子前面的灯下做事吧，而且穿着隔离衣，露在外面的也就一部分脸了，离台子稍远点其实也没事的（不行就背过去站），但还是建议开紫外的时候人不要在室内。。PS.我大学的老师有一次做胶回收的时候照着紫外切胶觉得没什么事，结果第二天脸上果断蜕皮，一个星期才好，之后果断买了个紫外防护面罩切胶用。。。

569981454

首先谢谢大家，但是我想问的是有的时候在超净台紫外开的过程中，依旧有一些事情必须呆在实验室内，这样的话会对人体有多大的伤害？