人IPS传代问题

sarah19860420

昨天在给HIPS传代时，用机械加没消化法结合进行细胞传代，，当时在肉眼可见以及镜下看起来较大的IPS细胞团，在24小时后贴壁的很少，反而是那些不可见的少量细胞贴壁效果较好，想问下论坛的朋友们，在人IPS传代方面有没有什么经验可以介绍，一般传代的团块大概是多大呢，大概多少个细胞呢。，能帮忙解释下为什么嘛？谢谢6 [, J& S2 I) e2 y* {
而且有没有人能帮忙传一下IPS贴壁第二天克隆的样子呢。我的feeder上出现很平的那种克隆形状，但是不是很确定。而这些细胞在接种前的feeder上是没有的。" }& u' j4 Y0 Z5 b; Z/ u
本人不能提供照片，很不好意思，实验室的显微镜不能照相，555

sarah19860420

是不是细胞团蜷缩在一起成团的时候也会影响细胞的贴壁情况呢。

yumeixing

嗯，同问。我最近也发现细胞团块小的容易贴壁，但细胞团块大的生长较快，状态也好一些。

细胞-77

传代时可以加Y-27632，合适的细胞团大约在60微米，100多个细胞左右吧！传代时酶要洗干净，贴壁后及时换液，第二天或者第三天挑出分化的细胞。个人意见，仅供参考。

ligangtiancai

我的经验是：四型胶原酶37度消化50分钟，消化下来的克隆用移液管吸入15ml离心管中。待克隆沉淀后吸弃上清，加入培养基重悬，反复一次。然后用10ml corning 一次性移液管吸取全部液体，将管尖提起距离心管底部约5-7cm，使劲吹出全部液体使之撞壁从而成为小克隆，可反复2-3次使之成为大小均匀，肉眼观大小适中的克隆团。待大多数均匀大小的克隆沉淀后吸弃尚未下沉的小克隆，余下克隆按1:6传代。

sizhengliu

回复 细胞-77 的帖子! @. R  `1 t! a3 x6 c7 Q

# k. s5 @4 J# ^$ L; T& B请问你在ips传代时加的Y-27632终浓度是多少？

frankieisme

回复 sizhengliu 的帖子4 K/ ?6 X1 I: D: N4 I6 z

. X8 T( u# ~3 s6 P& V1:500 diluted

sizhengliu

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6 J7 V2 f4 {7 S
$ K0 l* m: f7 p4 S* b' W您的意思是1mg可以配制500ml培养基？

frankieisme

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3 E8 Z7 A9 ^5 H3 e; k# ?- k) F: k" a6 W: G0 T# W
When I thawed the iPS cells, I will use Rock inhibitor at 10uM. You need double check the original concentration but we add at 1:500 using the calbiochem liquid product.
) j! v8 ~; ?& L* D% w; h% D$ \  T' d1 x3 K7 v

sizhengliu

回复 frankieisme 的帖子1 e$ U; I1 H( }: b& \! C+ j( j( r

: P9 N4 }" p2 a4 m0 pthank you！