ES细胞在标记染色时如何与MEF细胞分开

yuye3000

最近ES细胞要做RT－PCR和荧光染色。可我的ES是长在MEF上的。- |5 J7 x+ Y# H/ @
这样就有一个问题了，我做PCR测量OCT-4,Sox2等 ，或用病毒传染荧光至细胞中，会把两种细胞都测量和传染上。
; F& `0 b' N: y7 l/ ?有什么方法能分开。
2 j7 W, i6 u- O$ ~$ E以前听一些坛子里的战友说，随着ES的传代，MEF会越来越少。可ES每次传代都会传在MEF上，不会越来越少啊？

随风的天使

在做干细胞检测时，经常会遇见这种类似的问题。你可以尝试，在收样之前先将含有干细胞和饲养层细胞的混合细胞液，传至一个新的未铺明胶的板子中，1个小时后，饲养层细胞会贴壁，干细胞不会贴壁，你轻轻将上层液体收集，离心富集细胞。希望可以帮到你。

song58

回复 yuye3000 的帖子
4 e/ U  L, Q2 O% ^9 B2 ]* y- f. i/ @% n1 ^4 S
兄弟你养的是human的还是mouse的？
8 i  {: q) b7 Z3 Q5 u, Y0 I不管哪种，feeder都不表达Oct4和Sox2，RT和IF都检不出来。你就放心的整吧。
% s5 `! \# i% Q1 U* |+ ?要是不放心，你可以拿feeder做的control，亲自验证一下。

jianghaixiang

将细胞消化重悬后差速贴壁30min至1小时。
9 f6 @- h+ M' {3 L吸取未贴壁的细胞悬液，重新接种至明胶包被的培养瓶内。
0 ^. ^8 u, r. C7 W连续传代几次，基本上就是比较纯的ES了。

modou1001

差速贴壁可以去除饲养层的  MEF大概30就可以贴壁完全了  然后收集的上清里面含有的饲养层就很少了