求教！关于小鼠iPS细胞EB培养的几个问题！

ligangtiancai

RT，本人准备做鼠iPS的悬滴法培养EB，有如下问题：: z; t1 i! ?: w* v* L
1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？. r7 i! k$ A# B  [- I* y6 h0 \
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？
/ M$ N/ b5 |( Y3.悬滴之间间隔多少？
) D+ [) x/ W1 v6 T; M5 k  p4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？+ \8 ^) H, Z% A% Z! g
5.其他需要注意的地方？
" P, J0 |8 t% w# T# C           先行谢过，谢谢！

mohanmud

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  j) b0 Q! ~. I8 r! P; n0 d% U- r0 T
1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？+ J# E5 J" m6 V" [) T& [/ ]
都没关系。: G1 b8 j4 i7 L2 c" o' Z

6 U! d& Q) k3 E* m% w. a2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？& t  }: H! \6 B4 e! d0 d, l
一般500个细胞左右每滴，15-20 ul 培养基
+ j" C) p9 s- s1 N% [* R% Y0 D$ @  O. e3 t$ M1 R3 K6 A0 a
3.悬滴之间间隔多少
$ m( s8 {% N0 t  e2 l这个没固定要求，你操作时候只要两滴不会融合在一起就行了
: W) b, R6 H3 g$ x- ?6 s4 @1 Z% q  `5 f( ~7 @
4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？
+ Z0 s: E. n; H! D两天之后EB稳定了加入培养基混一起培养就行。
6 s! Z7 D. Q! F6 f" \* R; w: s2 p: Q" c
5.其他需要注意的地方' c3 {  `: v" g1 j7 N, V1 j
可以试着suspension EB培养，方便多了，而且达到的效果和悬滴法差不多。7 k' D, L' Q! H# V2 P, ]8 e

刘森泉

做过的能给个详细的protocol吗？非常感谢！

shangchunhua

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$ b/ D1 x, y. y6 R7 z; z
! E! G; b0 |' F) J3 ~" Y" [提供两篇文献，楼主参考一下吧

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子* O3 x. J3 i$ C5 @
. k% U8 `0 f1 J& r2 I$ V/ J
谢谢，挺有帮助! 还有个问题，就是我想用25孔板做iPS的免疫荧光染色，不知没孔应该加多少的细胞量比较合适？谢谢

ligangtiancai

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5 Y, I9 _% T: R6 q: A: J% t. C- O& u1 D
学习一下，太感谢了！

天龙八部

学习，感谢分享！