求教！关于小鼠iPS细胞EB培养的几个问题！

ligangtiancai

RT，本人准备做鼠iPS的悬滴法培养EB，有如下问题：
& C* [% R9 g5 O- u. Y5 {1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
  l( v7 [9 p' C& y/ w2 q$ S. W2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？$ w/ ~- y4 U2 }5 P0 |; y; L( i
3.悬滴之间间隔多少？
! u, i' K1 Z# K5 y! J) h4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？6 j8 r* q1 C6 ^2 e
5.其他需要注意的地方？
5 x2 |; o. M* w1 e( H4 A; @. N# M           先行谢过，谢谢！

mohanmud

回复 ligangtiancai 的帖子. J) j7 {( A- p5 q) \0 S

! A2 f4 D1 t, q& M1 p1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
6 y' |% j: o7 h+ r% a( c都没关系。
% m  ^" ~+ t& p+ |  X
- P. |: M; {0 v* ^! o4 o& r2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？% T' ~' I. C7 [1 ~; |
一般500个细胞左右每滴，15-20 ul 培养基
1 y5 q+ V* k! C
- g9 [$ c* ^" ^! O, B' }' {3.悬滴之间间隔多少
( M2 O+ @( y' [- O这个没固定要求，你操作时候只要两滴不会融合在一起就行了
# {$ j! ^6 v9 L. z- x( E
! A& o6 i5 |1 Z4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？8 {* n7 {; M9 y( }1 `
两天之后EB稳定了加入培养基混一起培养就行。! `" r: S2 {0 o$ a7 m: h
3 v3 Z) A" z6 o  J: W; q. \9 H
5.其他需要注意的地方+ O8 e2 N3 V, F5 Z" i
可以试着suspension EB培养，方便多了，而且达到的效果和悬滴法差不多。
5 e; @+ V, n# r- h0 J( W

刘森泉

做过的能给个详细的protocol吗？非常感谢！

shangchunhua

回复 ligangtiancai 的帖子( I5 v* I/ b8 r0 Z: f

3 N( [! a: b" f5 n( P" n/ J6 V提供两篇文献，楼主参考一下吧

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子
0 v0 e3 J  q% j
" G# x" b: M" G: z8 s8 K谢谢，挺有帮助! 还有个问题，就是我想用25孔板做iPS的免疫荧光染色，不知没孔应该加多少的细胞量比较合适？谢谢

ligangtiancai

回复 shangchunhua 的帖子
1 f( j' j: v& n) p2 P5 @8 p
$ `' Y4 N2 n6 T4 l( C' N% k$ G学习一下，太感谢了！

天龙八部

学习，感谢分享！